, Russian Federation
VNIRO (Chief Researcher of the Department of Invertebrate Aquaculture; the Department of Aquaculture and Beekeeping, Professor, Chief Researcher)
Moscow, Russian Federation
UDK 63 Сельское хозяйство. Лесное хозяйство. Охота. Рыбное хозяйство
GRNTI 34.01 Общие вопросы биологии
OKSO 06.06.01 Биологические науки
BBK 28 Биологические науки
TBK 64 Биологические науки
A methods and equipment used for commercial fishes’ reproductive system assessment are studied. A modified tester rod for oocytes state and gonads maturation stage estimation of artificially bred carp fishes is described.
aquaculture, reproducing, sturgeons, carp, hybrids, gonads, tester rod, biopsy, maturation stages
Введение
В практике искусственного воспроизводства многих хозяйственно-ценных видов рыб, не говоря уже о товарной аквакультуре, для обеспечения успеха, основополагающее значение имеет точное определение готовности производителей (главным образом, самок) к продуцированию половых продуктов надлежащего рыбоводного качества.
Для объективного контроля стадии зрелости гонад и актуального состояния ооцитов предложены, и в той, или иной степени используются, самые разнообразные методы – от анализа морфометрических показателей производителей до оценки их физиологического статуса и применения разнообразных приборов и устройств. Однако далеко не все они пригодны к практическому применению и получили широкое распространение в рыбоводной практике.
Например, был предложен метод прижизненного определения зрелости гонад у белого толстолобика, в основу которого положен анализ сопряжённой изменчивости показателей зрелости и комплекса морфологических характеристик рыб [18]. Он базируется на сложной математической обработке (множественный регрессионный анализ) комплекса морфометрических признаков, включая и гистологическое изучение гонад. В рамках регрессионного анализа показатель степени зрелости гонад рассматривается как функция комплекса переменных, в качестве которых выступают отдельные морфометрические признаки. Прямая количественная оценка влияния семьи и условий выращивания на степень зрелости по морфотипу здесь получена с использованием модели трехфакторного дисперсионного анализа, а различия устанавливаются на основе учета комплекса из 23 (!) признаков морфотипа с использованием многомерной статистики [18]. Неудивительно, что длительность реализации, трудоемкость и сложный математический аппарат фактически исключают применение этого метода в производственной практике.
Некоторые из вновь предлагаемых способов, позиционируемые их авторами как потенциально востребованные для отбора производителей при формировании маточных стад, так и для функциональной диагностики завершающих этапов созревания, требуют не только наличия биохимической лаборатории, но и штата квалифицированных специалистов. В частности, у разновозрастных особей некоторых осетровых проводилось определение в сыворотке крови и моче концентрации осмотически активных веществ, как основного показателя для последующей разработки теста по определению стадии зрелости. Было установлено, что у половозрелых самок гибрида стерлядь × белуга (♀ Acipenser ruthenus L. × ♂ Huso huso L.) на второй стадии зрелости гонад концентрация осмотически активных веществ в моче почти в два раза выше, чем у неполовозрелых особей, а половозрелые самки на IV стадии зрелости гонад отличаются по осмоляльности мочи от молодых и незрелых взрослых особей в 3 и 1,4 раза, соответственно. На основании этих данных предложено использовать осмоляльность мочи в качестве наиболее технологичного диагностического теста степени зрелости самок [10]. Очевидно, что этот и подобные биохимические тесты очень далеки от производственных реалий и, если и могут найти практическое применение, то исключительно при активном участии профильных специалистов научных учреждений.
Интенсивное развитие осетроводства, за последние три десятилетия ставшего глобализированной отраслью аквакультуры, сопровождалось внедрением технологических инноваций, базирующихся на достижениях научно-технического прогресса. Естественно, такой базовый элемент технологий полноцикличного культивирования, как воспроизводство, не мог остаться в стороне от этого процесса. В первую очередь это касается таких методов оценки функционального состояния репродуктивной системы производителей, как эндоскопия, коротковолновая спектроскопия в ближней инфракрасной области [30] и, в первую очередь, ультразвуковая диагностика [33; 34]. Несмотря на ряд объективных преимуществ, сводящихся в целом к возможности быстрой обработки значительного поголовья производителей с достаточной достоверностью получаемых результатов, эти прогрессивные методы ограниченно применимы в полевых условиях, требуют специальной подготовки персонала и, главное, дорогостоящего приборного парка.
Абсолютное большинство из более чем 4000 субъектов предпринимательской деятельности, занимающихся аквакультурой в Российской Федерации [1], в настоящее время не может себе позволить приобретение соответствующего оборудования по вполне объективным экономическим причинам. Перспективы развития лизинга этих высокотехнологичных приборов сейчас, очевидно, являются весьма проблематичными. Для хозяйств, располагающих репродуктивными стадами, численность которых не превышает нескольких десятков производителей, приобретение таких приборов экономически не оправдано. Их, естественно, необходимо иметь немногочисленным у нас крупным предприятиям, осуществляющим икорно-товарное производство или массовое получение посадочного материала (например, ОРЗ). То же относится и к исследовательским центрам.
Поэтому неудивительно, что уже более полувека в практике отечественного рыбоводства превалирует биопсийный («щуповой») метод определения стадии зрелости гонад. Он применяется при воспроизводстве широкого спектра объектов культивирования – от карпа (сазана) [12; 22] и толстолобиков [9; 11; 19] до всех видов осетровых [3; 14; 21; 23; 24; 29;], веслоноса [2; 20] а также перспективных объектов культивирования, таких как кефали (сем. Mugilidae): лобан (Mugil cephalus L.), сингиль (Liza aurata Risso) и пиленгас (Mugil soiuy Basilewsky) [13], а также вырезуб (Rutilus frisii frisii) [16].
Только «щуповой» способ, как и любой другой метод биопсийного исследования, позволяет не только непосредственно оценить состояние тканей генеративных органов, но и подвергнуть, при наличии такой необходимости, полученный биоптат дальнейшему гистологическому (цитологическому) исследованию. Общеизвестным (но не единственным) простейшим, и имеющим большое практическое значение примером здесь, со всей очевидностью, является определение показателя (коэффициента) поляризации ооцитов [7; 31; 35].
Благодаря простоте, достаточной эффективности и доступности, он не утрачивает своего значения и в современных условиях. Биопсия гонад осетрообразных осуществляется путём введения через брюшную стенку или через боковые мышцы рыбы специального устройства – стального щупа, в целях извлечения и последующего исследования состояния ооцитов и тканей гонад [8].
Щуп традиционной конструкции представляет собой устройство в виде заострённого на конце металлического стержня диаметром 4-6 мм с желобком глубиной и шириной 3,0-3,5 мм и длиной 50-60 мм [31]. Известно также устройство, представляющее собой щуп в виде заострённого на конце металлического стержня диаметром 3,0-4,0 мм с желобком глубиной 2,0-2,5 мм, шириной 2,5-3,0 мм, длиной 17-70 мм и общей длиной 210 мм. Противоположный конец стержня загнут в виде кольца или эллипса для удобства удерживания его в руке исследователя [11; 19; 23; 20]. В некоторых известных модификациях инструмента предлагается к наконечнику горячей посадкой или соединением пайкой прикреплять стержень, в качестве ручки для удобства удерживания [21; 35].
Результатом дальнейшего совершенствования инструментов для биопсийного контроля состояния гонад стало создание, в наибольшей степени приближенного к желаемому эталону, устройства, представляющего собой набор, заострённых на конце, металлических стержней, диаметр которых варьирует в трёх диапазонах, в зависимости от изучаемого вида осетровых рыб: для русского осетра – 4,5-5,0 мм; для белуги – 5,5–6,0 мм; для севрюги, шипа и стерляди – 3–4 мм. Длина желобка всех стержней 3-6 см. Противоположный конец щупа загнут в виде эллипса [34]. Диаметры стержней здесь подобраны в соответствии с размерами ограниченного числа исследуемых видов производителей осетровых рыб.
Результаты совершенствования метода
Общими недостатками, всех известных устройств для биопсийного исследования производителей, являются следующие: диаметр используемого стержня выбирается без учёта размеров производителей, которые варьируют, в зависимости от вида исследуемых рыб; глубина, ширина и длина жёлоба выбираются произвольно, безотносительно размеров ооцитов, которые также зависят в основном от видовой принадлежности производителей; невозможно дать предварительную оперативную оценку завершённости IV стадии зрелости ооцитов; щупы недостаточно эргономичны, и нередко при работе в полевых условиях выскальзывают и тонут в воде.
Очевидными направлениями совершенствования биопсийного метода являются: снижение травматизации исследуемых рыб, от применения не соответствующего особенностям вида диаметра стержня; обеспечение целостности, извлекаемых из гонад, ооцитов; обеспечение возможности с высокой точностью оперативного определения завершенности IV стадии их зрелости, а также исключение возможности безвозвратной утраты инструмента при его непроизвольном падении в водоем.
Основываясь на собственном многолетнем практическом опыте и анализе доступной информации, мы предложили устройство для определения состояния ооцитов и стадии зрелости гонад у осетрообразных и карповых рыб, в котором указанные недостатки существующих модификаций в значительной степени преодолены [17]. 
|
1 |
|
4 |
|
2 |
|
3 |
|
5 |
|
6 |
|
Рисунок 1. Общий вид и составные части инструмента |
Устройство (рис. 1) изготавливается из прутка нержавеющей стали (Ø I) 5 мм (1) и включает четыре стержня (№№ 1-4) различных типоразмеров, каждый из которых имеет остриё (2), желоб (3) и резьбу (4) для крепления к рукоятке (5) из материала с высокой положительной плавучестью.
Длина, ширина и глубина желоба выбраны в соответствии с размерными характеристиками ооцитов и рассчитаны на строго определённое их количество – 15 шт. на IV завершённой стадии зрелости (таблица). Если в жёлоб поместилось большее количество фолликулов, это указывает, что они с высокой долей вероятности ещё не достигли IV завершённой стадии зрелости. Если ооциты перезревают и находятся на стадии начала резорбции, их количество в жёлобе меньше 15 экз., так как они более крупные.
Щупы комплектуются съёмной рукояткой (5) из лёгкого и прочного материала (дерево, пластик), который обеспечивает устройству со съёмной ручкой положительную плавучесть и позволяет исключить утрату устройства в результате случайного падения в воду. Рукоятка может изготавливаться для прямого или Т-образного соединения со стержнем. Для фиксации щупа, используемого в каждом конкретном случае, в рукоятку устанавливается врезная гайка (6) с диаметром и шагом резьбы, соответствующими резьбе на конце щупа. Рекомендуемая длина рукояти 12-15 см. В отдельных случаях длина рукояти подбирается, исходя из индивидуальных особенностей эксплуатирующих устройство специалистов (рис. 2 а, 3).
Таблица. Параметры стержней щупов
|
Диаметр прутка Ø II (№ щупа) |
Размеры желобка стержней |
Вид, (гибрид) рыб; диаметр зрелых ооцитов, мм |
||
|
Ширина |
Глубина |
Радиус |
||
|
3,5 мм (1) |
1,9-2,0 мм |
2,5-2,6 мм |
0,95 мм |
Стерлядь (1,9-2,5); веслонос (2,35-2,4) бестер породы «Аксайская» (гибрид ♀ стерлядь × ♂ белуга); карп; белый и чёрный амуры; белый и пёстрый толстолобики; вырезуб (1,6-1,7) |
|
4,0 мм (2) |
2,4-2,5 мм |
3,0-3,1 мм |
1,2 мм |
Сибирский (2,4-2,9) и амурский (2,5-3,0) осетры; севрюга (2,8-3,0); шип (~3,0), бестер породы «Бурцевская» и «Внировская» (гибриды ♀ белуга × ♂ стерлядь) |
|
4,5 мм (3) |
2,9-3,0 мм |
3,5-3,6 мм |
1,45 мм |
Русский (3,3-3,6), персидский (3,2-3,8) и атлантический осетры; гибрид (♀ осётр русский × ♂ осётр ленский); гибрид (♀ осётр амурский × ♂ калуга) |
|
5,0 мм (4) |
3,4-3,5 мм |
4,0-4,1 мм |
1,7 мм |
Белуга (3,6-4,3); калуга (3,2-4,0); сахалинский осётр |
В зависимости от вида исследуемой рыбы, для проведения биопсии используют стержень соответствующего диаметра (Ø II). На имеющий резьбу конец стержня навинчивается ручка (5), после чего проводится процедура отбора биоптата из гонад в, соответствии с методикой В.З. Трусова, но стержень вращают вокруг своей оси на 180° и извлекают его из тела рыбы (рис. 2, 4, 5). В результате в желобе стержня оказывается фрагмент гонады (ооциты или семенник). Поскольку длина (X), глубина (Y), ширина (Z) и радиус (R) закругления желоба стержней соответствует размерам икры на IV завершённой стадии зрелости, с учетом вида исследуемой рыбы, ооциты располагаются в один ряд последовательно друг за другом. При этом, если их уровень зрелости соответствует IV завершённой стадии, в желобе их помещается ровно 15 экземпляров. Если фолликулы не достигли IV завершённой стадии зрелости, а находятся на более ранних стадиях, их количество в желобе превышает 15 экз., так как они более мелкие (рис. 2 б, в). Если ооциты перезревают и находятся на стадии резорбции, их количество в желобе меньше 15 экз., так как они более крупные. Таким образом, по количеству фолликулов в жёлобе можно с высокой долей вероятности быстро определить завершённость IV стадии зрелости.
Травматичность этого метода, на которой обычно заостряют внимание специалисты, продвигающие альтернативные способы диагностики стадий зрелости гонад, сильно и безосновательно преувеличивается. При элементарной подготовке и некотором практическом навыке персонала риск каких-либо последствий для здоровья производителей минимален. В более чем двадцатилетней работе авторов случаев гибели производителей из-за последствий биопсийного обследования не наблюдалось, за исключением единичных случаев при бонитировочном исследовании истощённых особей. В практике авторов биопсийный метод экспресс-диагностики успешно применялся в течение многих лет при разработке промышленных технологий полноцикличного культивирования анадромных осетровых за пределами природных ареалов [5; 25; 26; 27], веслоноса, а также при массовом производстве перспективных для товарного выращивания гибридов [28], сибирского осетра и стерляди (рис. 2-6).
Выводы
Исключительная портативность, отсутствие потребности в электроснабжении, низкая стоимость и простота процедуры реализации обеспечивают эффективность применения биопсийного метода в полевых условиях, которые и в наше время могут приближаться к экстремальным. Ярким примером здесь может быть работа группы В.Е. Хрисанфова с таким чрезвычайно редким видом, как сахалинский осетр [32] (рис. 7).
В сочетании с современными регламентами гормональной стимуляции созревания, адаптированными к условиям конкретного производства и физиологическим и видовым особенностям производителей [4; 6; 15], он обеспечивает устойчивое достижение необходимых производственных показателей и высокое качество, получаемых при полноцикличном культивировании, потомств.
Таким образом, модифицированное устройство позволяет: снизить травматизацию исследуемых рыб от применения несоответствующего виду диаметра стержня; обеспечить целостность, извлекаемого из гонад, биоптата; с высокой долей вероятности оперативно определить завершённость IV стадии зрелости ооцитов, а также исключить утрату устройства в случае его падения в воду.
Рекомендуем использовать данную модификацию устройства для биопсии, как на рыбоводных заводах, так и на других предприятиях, осуществляющих воспроизводство осетрообразных и карповых рыб.
Авторы выражают признательность сотруднику ФГБУ «Главрыбвод» В.Е. Хрисанфову за любезно предоставленную иллюстрацию.
1. Analiz sostoyaniya i perspektivnye napravleniya razvitiya akvakul'tury: nauch. analit. obzor / N.A. Golovina, N.N. Romanova, P.P. Golovin, V.M. Simonov i dr. - M.: FGBNU «Rosinformagroteh», 2019. – 88 s.
2. Biologicheskie osnovy razvedeniya i vyraschivaniya veslonosa (Polyodon spathula (Walbaum) / V.K. Vinogradov, L.V. Erohina, E.A. Mel'chenkov. - 2003. - M.: FGNU «Rosinformagroteh». – 344 s.
3. Biotehnologicheskie normativy po tovarnomu osetrovodstvu / Pod red. L.M. Vasil'evoy. - Astrahan': Izdatel'skiy dom «Astrahanskiy universitet», 2010. – 80 s.
4. Bubunec, E.V. Podbor optimal'nyh variantov gormonal'noy stimulyacii samok osetrovyh pri vnesezonnom poluchenii ikry na predpriyatiyah akvakul'tury / E.V. Bubunec // Rybnoe hozyaystvo. – 2012. – № 5. – S. 59–67.
5. Bubunec, E.V. Rybohozyaystvennye harakteristiki matochnogo stada shipa, vyraschennogo v industrial'nyh usloviyah / E.V. Bubunec // Vestnik Rossiyskoy akademii sel'skohozyaystvennyh nauk – 2010. – № 2. – S. 72–74.
6. Bubunec E.V., Primenenie gradual'nyh in'ekciy surfagona v netradicionnye sroki pri vosproizvodstve osetrovyh / E.V. Bubunec, A.V. Labenec //Agrarnaya nauka. - 2012. - № 2. – S. 26-28.
7. Detlaf, T.A. Zarodyshevoe razvitie osetrovyh ryb (sevryugi, osetra i belugi) v svyazi s voprosami ih razvedeniya / T.A. Detlaf, A.S. Ginzburg. - M., 1954. – 216 s.
8. Detlaf, T.A. Razvitie osetrovyh ryb. (Sozrevanie yaic, oplodotvorenie, razvitie zarodyshey i predlichinok) / T.A. Detlaf, A.S. Ginzburg, O.I. Shmal'gauzen. - M., 1981. – 224 s.
9. Duvarova A.S. Ispol'zovanie metoda biopsii dlya opredeleniya zrelosti oocitov i modifikaciya shem gipofizarnyh in'ekciy tolstolobika / A.S. Duvarova // Sbornik nauchnyh trudov GosNIORH. – 1980. – Vyp. 160. – S. 79-86.
10. Innovacionnye aspekty v diagnostike stepeni zrelosti gibridov sterlyad' × beluga (Acipenser ruthenus Linnaeus, 1758 × Huso huso Linnaeus, 1758), vyraschennyh v ustanovkah zamknutogo vodosnabzheniya / G.F. Metallov, E.I. Ponomareva, P.P. Geraskin, i dr. // Vestnik Astrahan. gos. tehn. un-ta. Ser.: Rybnoe hozyaystvo. - 2015. - № 2. – S. 57-65.
11. Instrukciya po vyraschivaniyu i ispol'zovaniyu proizvoditeley rastitel'noyadnyh ryb/ Sbornik normativno-tehnologicheskoy dokumentacii po tovarnomu rybovodstvu. – T.1. – M.: Agropromizdat, 1986. – S. 90-104.
12. Instrukciya po provedeniyu gormonal'noy stimulyacii proizvoditeley karpa pri rannem poluchenii lichinok/ Sbornik normativno-tehnologicheskoy dokumentacii po tovarnomu rybovodstvu. - T.1. – M.: Agropromizdat, 1986. – S. 119-130.
13. Kulikova N.I. Biotehnika iskusstvennogo vosproizvodstva kefaley (lobana, singilya, pilengasa) s opisaniem shemy tipovogo rybopitomnika / N.I. Kulikova, P.V. Shekk. - Kerch': YuGNIRO. 1996. – 27 s.
14. Mil'shteyn V.V. Osetrovodstvo. – M.: Legkaya i pischevaya promyshlennost', 1982. - 151 s.
15. Patent № 2500101 Rossiyskaya Federaciya, MPK A01K 61/00 (2006.01). Sposob vosproizvodstva osetrovyh ryb: № 2012139088/13 : zayavl. 13.09.2012 : opubl. 10.12.2013 / Bubunec E.V., Labenec A.V., Zhigin A.V.; – 7 s.
16. Patent № 2695862 Rossiyskaya Federaciya, MPK A61D 19/04 (2006.01) Sposob vvedeniya schupa pri otbore prob (biopsii) gonad vyrezuba Rutilus frisii frisii : № 2018134950 zayavl. 04.10.2018 : opubl. 29.07.2019 / Myshkin A.V.; – 7 s.
17. Patent № 2708156 Rossiyskaya Federaciya, MPK A01K 61/00 (2006.01). Ustroystvo dlya opredeleniya sostoyaniya oocitov i stadii zrelosti gonad u osetroobraznyh i karpovyh ryb: № 2019105326 : zayavl. 08.06.2018 : opubl. 04.12.2019 / Bubunec E.V., Novosadov A.G., Zhigin A.V., Labenec A.V.; – 9 s.
18. Reshetnikov S.I. Metod prizhiznennogo opredeleniya stepeni zrelosti gonad u belogo tolstolobika / S.I. Reshetnikov // Selekciya ryb. – M.: VO Agropromizdat. 1989. – S. 151-163.
19. Rukovodstvo po biotehnike razvedeniya i vyraschivaniya dal'nevostochnyh rastitel'noyadnyh ryb / A.M. Bagrov, A.K. Bogeruk, B.B. Verigin i dr., (Vinogradov V.K. red.). - Sankt-Peterburg: OOO «IP Kompleks», 2000. – 212 s.
20. Rukovodstvo po razvedeniyu i vyraschivaniyu veslonosa / E.A. Mel'chenkov, V.K. Vinogradov, L.V. Erohina. - M.: VNIIPRH, 1997. – 88 s.
21. Sbornik instrukciy i normativno-metodicheskih ukazaniy po promyshlennomu razvedeniyu osetrovyh ryb v Kaspiyskom i Azovskom basseynah. - M., 1986. – S. 31-32.
22. Sim Do Thek Prakticheskoe posobie po zavodskomu razvedeniyu sazana i karpa / Sim Do Thek. - M.: VNIRO, 1991. – 229 s.
23. Smol'yanov, I.I. Tehnologiya formirovaniya i ekspluatacii matochnogo stada sibirskogo osetra v teplovodnyh hozyaystvah / I.I. Smol'yanov. - M.: VNIIPRH, 1987. – 33 s.
24. Tehnologii i normativy po tovarnomu osetrovodstvu v VI rybovodnoy zone / Pod red. N.V. Sudakovoy. - M.: VNIRO, 2006. – 100 s.
25. Tehnologiya vyraschivaniya sevryugi (Acipenser stellatus) v industrial'nyh usloviyah / E.V. Bubunec, E.I. Shishanova, A.V. Labenec. i dr. - M.: RGAU-MSHA im. K.A. Timiryazeva, 2010. – 62 s.
26. Tehnologiya polnociklichnogo kul'tivirovaniya belugi (Huso huso L.) dlya rezervirovaniya geneticheskih resursov vida i racional'noy kommercheskoy ekspluatacii /A.V. Labenec, E.V. Bubunec, E.I. Shishanova i dr. - M.: «Pero», 2018. – 72 s.
27. Tehnologiya polnociklichnogo kul'tivirovaniya russkogo osetra (Acipenser gueldenstaedtii) dlya sohraneniya genofonda i tovarnogo vyraschivaniya /A.V. Labenec, E.V. Bubunec, E.I. Shishanova i dr. – M.: Izdatel'stvo RGAU-MSHA imeni K.A. Timiryazeva, 2012. – 83 s.
28. Tehnologiya polucheniya i vyraschivaniya gibrida sibirskogo osetra (Acipenser baerii) i belugi (Huso huso) / A.G. Novosadov, A.V. Labenec, E.I. Shishanova i dr. - M.: Izd-vo Rossel'hozakademii, 2008. – 37 s.
29. Tehnologiya formirovaniya i ekspluatacii matochnyh stad sibirskogo osetra v usloviyah industrial'nyh teplovodnyh hozyaystv / V.K. Vinogradov, N.A. Kozovkova, V.I. Kushnirov i dr. // Sbornik nauch.-tehnol. i metod. dokumentacii po akvakul'ture. - 2001. - M.: Izd-vo VNIRO. - S. 185-197.
30. Tovarnoe osetrovodstvo / E.I. Hrustalev, T. M. Kurapova, E.V. Bubunec i dr. – SPb.: Izdatel'stvo "Lan'", 2016. – 300 s.
31. Trusov, V.Z. Metod opredeleniya stepeni zrelosti polovyh zhelez samok osetrovyh / V.Z. Trusov // Rybnoe hozyaystvo. - 1964. - № 1. - S. 26-28.
32. Hrisanfov, V.E. Sostoyanie i perspektivy raboty po iskusstvennomu vosproizvodstvu sahalinskogo osetra / V.E. Hrisanfov, E.B. Lebedeva, A.V. Labenec // Mater. medunar. konf. «Zookul'tura i biologicheskie resursy» (Moskva, 4-6 fevralya 2004 g.) - M.: Tovarischestvo nauchnyh izdaniy KMK, 2005. – S. 61-64.
33. Chebanov, M.S. Ul'trazvukovaya diagnostika osetrovyh ryb / M.S. Chebanov, E.V. Galich. - Krasnodar: Prosveschenie-Yug, 2010. – 135 s.
34. Chebanov, M.S. Rukovodstvo po iskusstvennomu vosproizvodstvu osetrovyh ryb / M.S. Chebanov, E.V. Galich. - Ankara: FAO, 2013. – 325 s.
35. Ekspress-metod opredeleniya stepeni zrelosti gonad u proizvoditeley osetrovyh / B.N. Kazanskiy, Yu.A. Feklov, S.B. Podushka, A.N. Molodcov // Rybnoe hozyaystvo. - 1978. - № 2. – S. 24-27.
