Цель работы — оценка диагностической эффективности фракционированного антигена из половозрелых паразитов крупного рогатого скота — Setaria labiato-papillosa при дирофиляриозе (Dirofilaria immitis). Материалы и методы — антиген из половозрелых гельминтов S. labiato-papillosa, референс сыворотки инвазированных и не инвазированных собак. Реакция иммунодифузии (РИД) в агаровом геле с использованием референс сывороток собак, инвазированных D. immitis, и антигенов-экстрактов из S. labiato-papillosa и D. immitis. Метод гель-хроматографии на колонке Pharmacia, заполненной Superose 12 PrepGrade, и иммуноферментная реакция (ИФР). Результаты и обсуждение — методом РИД установили перекрестно-реагирующие антигенные компоненты у D. immitis и S. labiato-papillosa. Методом фракционирования антигена из S. labiato-papillosa получено 40 белковых фракций, из которых 7(17,5%) представляли интерес в диагностике дирофиляриоза. Диагностическая оценка этих фракций при дирофиляриозе проведена ИФР с 47 пробами сывороток собак, в том числе 11 проб с инвазией D. immitis; 6 — D. repens; 3 — Babesia canis; 3 — Toxocara canis; 9 — с непаразитарной патологией и 15 клинически здоровых. Результаты этого анализа показали, что из 11 проб сывороток крови собак,инвазированных D. immitis, в одной регистрировали ложноотрицательный ответ, а из 6 — с D. repens — в двух. Чувствительность теста составила 82,4%, специфичность — 83,3%. Аналогичный анализ этих сывороток, проведенный с очищенным антигеном-экстрактом из половозрелых D. immitis, показал чувствительность также 82,4%, а специфичность — 86,7%. Сопоставимость полученных результатов в диагностике дирофиляриоза ИФР с антигенными препаратами из сетарий и дирофилярий позволяет сделать заключение о возможности использования S. labiato-papillosa в качестве источника диагностического антигена при дирофиляриозе (D. immitis).
Setaria labiato-papillosa, Dirofilaria immitis, крупный рогатый скот, сыворотки собак, фракционированный антиген, иммуноферментная реакция.
Введение
За последние годы произошло значительное расширение ареала распространения дирофилярий, что привело к росту заболеваемости человека и животных дирофиляриозом и явилось следствием неослабевающего научного интереса к изучению этой медико- ветеринарной проблемы [6-10, 12, 19, 20].
Прижизненная диагностика дирофиляриоза, возбудителями которой являются D. immitis и D. repens, как правило, базируется на обнаружении микрофилярий в крови и их идентификации. Но поскольку дирофиляриоз продолжительное время может протекать бессимптомно, особенно при низкой интенсивности инвазии и соответственно низкой микрофиляриемии, то эти методы фактически не дают должного эффекта.
В таких случаях особый смысл приобретают исследования по разработке и использованию иммунодиагностических тестов, основу которых составляет выявление циркулирующих антигенов или антител, синтезируемых в организме инвазированного животного или человека.
1. Астафьев Б.А., Петров О.Е. Эволюционно-генетическая теория паразитизма // Успехи современной биологии — 1992. — т. 112, №2. — С. 163-175.
2. Бережко В.К., Хайдаров В.К., Дахно Н.С., Шкурка Е.П. Иммунохимический анализ соматического экстракта из половозрелых Dirofilaria immitis // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы докладов научной конференции ВИГИС — 2008. — вып. 9. — С. 69-73.
3. Бережко В.К., Написанова Л.А., Медведев А.Ю., Хайдаров К.А., Шинкаренко А.Н., Колесников П.В. Физико-химическая и иммунодиагностическая характеристика цельного и фракционированного соматического экстракта Dirofilaria immitis // Доклады Россельхозакадемии. — 2014. — №1. — С.71-74.
4. Бескровная Ю.Г., Нагорный С.А. Идентификация микрофилярий Dirofilariaspp. с помощью ПЦР // Матер. докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» — М. — 2008. — С. 73 -75.
5. Бескровная Ю.Г., Нагорный С.А., Васерин Ю.И. Оценка эффективности диагностики дирофиляриоза у собак с использованием соматического антигена Dirofilaria repens // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы докладов научной конференции ВИГИС —
6. Криворотова Е.Ю. Биологические аспекты дирофиляриоза в ряде субъектов Российской Федерации // Дис. … кандидата биологических наук. — 03.02.11. — Москва. — 2015. — 141 с.
7. Медведев А.Ю. Распространение дирофиляриоз собак в Краснодарском крае и разработка его диагностики иммуноферментной реакцией // Дис. … кандидата биологических наук. — 03.02.11. — Москва –2007 — С.137.
8. Сергиев В.П., Супряга В.Г., Дарченкова Н.Н., Жукова Л.А., Иванова Т.Н. Дирофиляриоз человека в России // Российский паразитологический журнал. — 2012. — № 4. — С. 60-64.
9. Сергиев В.П., Супряга В.Г., Бронштейн А.М., Ганушкина Л.А., Ракова В.М., Морозов Е.Н., Федянина Л.В., Фролова А.А., Морозова Л.Ф., Иванова И.Б., Дарченкова Н.Н., Жукова Л.А. Итоги изучения дирофиляриоза человека в России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни — 2014. — № 3. — С. 3-9.
10. Фисько М.А., Фирсов Н.Ф. Дирофиляриоз. / / — Ростов н/Д, 2006. — 110 С.
11. Хайдаров К.А., Бережко В.К. Антигенный спектр соматических экстрактов из половозрелых сетарий и дирофилярий // Российский паразитологический журнал. — 2009 — № 1. — С. 68–74.
12. Akao N. Human dirofilariasis in Japan // Trop Med Health. — 2011. — Vol. 39, N 1. Suppl 2. — P. 65-71.
13. Atwell R.B., Sheridan A.B., Baldock F.C. An evaluation of the Dirochek test for detection of Dirofilariaimmitis antigen in dogs // Aust. Vet. J. — 1988. — Vol. 65, N 5. — P. 161-162.
14. Capron A., Brygoo E.R., Afchain D. Apport de letude de la structure antigenique a la phylogenie des Helminthes // Bull. Mus. Nat. hist. natur. Zoo.– 1972–Vol. 55–p. 877-885.
15. Collins G.H., Pope S.E. An evaluation of an ELISA test for the detection of antigens of Dirofilaria immitis // Aust. Vet. J. — 1987. — Vol. 64, N 10. — P. 318-319.
16. Gioia G., Lecová L., Genchi M. et al. Highly sensitive multiplex PCR for simultaneous detection and discrimination of Dirofilaria immitis and Dirofilaria repens in canine peripheral blood. / / Vet. Parasitol. — 2010. — Vol. 172, N 1-2. — P. 160-163.
17. Latrofa M.S., Dantas-Torres F., Annoscia G. et al. A duplex real-time polymerase chain reaction assay for the detection of and differentiation between Dirofilaria immitis and Dirofilaria repens in dogs and mosquitoes // Vet. Parasitol. — 2012. — Vol. 185, N 2-4. — P. 181-185.
18. Lee A.C., Bowman D.D., Lucio-Forster A. et al. Evaluation of a new in-clinic method for the detection of canine heartworm antigen // Vet. Parasitol. — 2011. — Vol. 177, N 3-4. — P. 387-391.
19. Mc Call J.W., Genchi C., Kramer L.H. et al. Heartworm disease in animals and humans // Adv. Parasitol. — 2008. — Vol. 66. — P. 193-285.__ 20. Morchón R., Carretón E., González-Miguel J., Mellado-Hernández I. Heartworm Disease (Dirofilariaimmitis) and Their Vectors in Europe — New Distribution Trends // Front. Physiol. — 2012. — Vol. 3. — Article 196.
20. Morchón R., Carretón E., González-Miguel J., Mellado-Hernández I. Heartworm Disease (Dirofilariaimmitis) and Their Vectors in Europe — New Distribution Trends. Front. Physiol., 2012, vol. 3, Art. 196.
21. Renaud F. Biodiversite, genetiqueet evolution dans les systemeshotes-parasites // Bull. Soc. Zool. Ff. — 1992. — V. 117. — N 1. — P. 109-115.
22. Rivasi F., Boldorini R., Criante P. et al. Detection of Dirofilaria (Nochtiella) repens DNA by polymerase chain reaction in embedded paraffin tissues from two human pulmonary locations // APMIS. — 2006. — Vol. 114, N 7-8. — P. 567-574.
23. Sun M., Zhuo W., Guo S. et al. Serological survey of canine dirofilariosis in Chongqing, Kunming, Nanchang, Fuzhou, Guangzhou, Shenzhen, and Nanning in Southern China // Vet. Parasitol. — 2012. — Vol. 185, N 2-4. — P. 225-228.
24. Weil G.J., Malane M.S, Powers K.G. Detection of circulating parasite antigens in canine dirofilariasis by counterimmunoelectrophoresis // Am. J. Trop. Med. Hyg. — 1984. — Vol. 33, N 3. — P. 425-430.
25. — вып. 10. — С. 61-63.
