Благовещенск, Амурская область, Россия
Цель работы – исследование активности процессов липопероксидации и системы антиоксидантной защиты в крови пуповины новорожденных от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности. Исследованы активность пероксидации липидов и антиоксидантный статус у 30 новорожденных детей от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности и у 25 – от ЦМВ-серонегативных женщин. Для определения продуктов окислительной модификации липидов использовали эритроциты, антиоксидантный статус оценивали в плазме крови вены пуповины. Содержание ТБК-активных продуктов определяли флуорометрическим методом, лизофосфатидидхолина – методом тонкослойной хроматографии, арахидоновой кислоты – методом газожидкостной хроматографии. Антиоксидантный статус оценивали по содержанию α-токоферола и активности супероксиддисмутазы. Регистрацию оптических плотностей и флуоресценцию проводили с помощью спектрофлуориметра. В ходе исследования установлено увеличение содержания в эритроцитах крови пуповины новорожденных от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности ТБК-активных продуктов в 2,1 раза (р˂0,001), лизофосфатидидхолина в 1,9 раза (р˂0,001) и арахидоновой кислоты в 1,5 раза (р˂0,001). Антиоксидантный статус крови пуповины характеризовался снижением содержания α-токоферола в 1,5 раза (p<0,01) и активности супероксиддисмутазы в 1,3 раза (р˂0,001) по сравнению с аналогичными показателями в группе новорожденных от ЦМВ-серонегативных женщин. Результаты проведенных исследований показывают, что обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности сопровождается развитием окислительного стресса и напряжения в системе антиокислительной защиты в крови пуповины новорожденных за счет повышенного расхода α-токоферола и подавления активности супероксиддисмутазы.
цитомегаловирусная инфекция, новорожденные, кровь пуповины, пероксидация липидов, антиоксидантная защита.
Обострение цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции во время беременности способствует изменению характера обменных и метаболических процессов в организме женщины, которые сопровождаются формированием новых порочных кругов в цепи причинно-следственных отношений, усугубляющих течение, как основного заболевания, так и патологий, предопределяющих скрытое неблагополучие развивающегося плода [7, 8, 10, 14]. Важным патогенетическим фактором таких нарушений является активация процессов пероксидации липидов на фоне низкой антиоксидантной активности различных компонентов системы антиоксидантной защиты [5, 7, 9]. Имеющиеся сведения о роли процессов пероксидации липидов и активности антиоксидантных систем при вирусных инфекциях в период беременности являются недостаточно раскрытыми. Приводимые в литературе данные не касаются проблемы изучения взаимоотношений между активностью ЦМВ в период беременности и состоянием системы «перекисное окисление липидов–антиоксидантная защита» (ПОЛ-АОЗ) и их роли в патогенезе нарушений развития плода [2, 3]. Тем не менее, неоспорим тот факт, что ткани плода подвержены высокому риску окислительного повреждения из-за физиологического дисбаланса анти- и прооксидантов [13].
Целью исследования явилось исследование активности процессов липопероксидации и системы антиоксидантной защиты в крови пуповины новорожденных от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности.
Материалы и методы исследования
Проводилось проспективное исследование по типу случай-контроль 55 новорожденных, рожденных в срок 37-38 недель, из них 30 детей (основная группа) от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности (28-34 недель) и 25 детей – от ЦМВ-серонегативных женщин (контрольная группа).
Критериями включения в исследование явились обострение ЦМВ инфекции в третьем триместре беременности, стойкая клиническая ремиссия герпесвирусной инфекции.
Критерии исключения из исследования: первичная ЦМВ инфекция, обострение других воспалительных заболеваний экстрагенитальной патологии, наличие инфекций, передающихся половым путем.
Исследования проведены в соответствии с кодексом этических принципов Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации с поправками 2013 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Минздрава РФ №200н от 1 апреля 2016 года. На проведение исследования от каждой женщины было получено информационное согласие.
Кровь из вены пуповины забирали в стандартные вакуумные пробирки объемом 5 мл. Для определения продуктов ПОЛ использовали эритроциты, антиоксидантный статус оценивали в плазме и эритроцитах крови вены пуповины. Содержание ТБК-активных продуктов (ТБК-АП) в мембране эритроцитов определяли спектрофотометрическим методом на спектрофотометре Appel UV-303 (Япония) [1], лизофосфатидидхолина – методом тонкослойной хроматографии [4], арахидоновой кислоты – методом газожидкостной хроматографии на хроматографе Хроматек Кристалл-2000М (Россия). Содержание в плазме крови пуповины α-токоферола определяли на спектрофлуориметре Hitachi (Япония) [11] и активности в эритроцитах крови пуповины супероксиддисмутазы (СОД) спектрофотометрическим методом (наборы реагентов «RANDOX Laboratories Ltd.», Англия).
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программного пакета прикладных программ Statistica 6.0. Определение достоверности различий средних значений сравниваемых параметров между разными выборками (M±m) проводилось с использованием непарного t-критерия Стьюдента (р).
Результаты исследования и их обсуждение
В основной группе новорожденных было установлено достоверное увеличение в крови вены пуповины показателей ТБК-активных продуктов в 2,1 раза (p<0,001) по сравнению с новорожденными контрольной группы (таблица). На этом фоне отмечалось уменьшение активности внутриэритроцитарной супероксиддисмутазы в 1,3 раза (p<0,01), что усиливало образование пероксида водорода и ферментативный гидролиз мембранных фосфолипидов. Данный факт подтверждался увеличением показателей ацилированной фракции фосфатидилхолина – его лизоформы в 1,9 раза (p<0,001) по сравнению с новорожденными контрольной группы. Вместе с тем в мембране эритроцитов крови вены пуповины отмечалось увеличение содержания арахидоновой кислоты в 1,5 раза (p<0,001), обладающей мембранодестабилизирующими свойствами благодаря ее участию в процессах свободно-радикального окисления и пероксидации липидов. Также в крови вены пуповины новорожденных основной группы было установлено уменьшение содержания α-токоферола в 1,4 раза (p<0,01) по сравнению с новорожденными контрольной группы.
Таблица
Биохимические параметры, характеризующие процессы ПОЛ и АОЗ в крови вены пуповины новорожденных при обострении ЦМВ инфекции в третьем триместре беременности
|
Показатели |
Контрольная группа (n=30) |
Основная группа (n=25) |
р |
|
ТБК-АП, ммоль/л |
11,40±0,45 |
24,60±0,60 |
<0,001 |
|
Арахидоновая кислота,% |
5,60±0,35 |
8,40±0,24 |
<0,001 |
|
Лизофосфатидилхолин,% |
6,70±0,10 |
12,80±0,12 |
<0,001 |
|
α-токоферол, ммоль/л |
1,84±0,04 |
1,35±0,03 |
<0,01 |
|
Супероксиддисмутаза, ЕД/г Hb |
248,73±3,21 |
196,20±1,45 |
<0,01 |
Обострение ЦМВ инфекции в третьем триместре (28-34 недель) беременности оказывает неблагоприятное влияние на плод и новорожденного. Потенциальным механизмом токсичности и повреждения клеток и тканей плода является гиперпродукция свободных радикалов, которые генерируются активированными иммунокомпетентными клетками в организме матери и плаценты, при повреждении эндотелия плодовых сосудов и нарушении метаболизма ненасыщенных жирных кислот в плаценте [12].
Свободные радикалы и пероксиды липидов способствуют деструкции мембран и повреждению эритроидных клеток, их гемолизу, что вызывает развитие внутриутробной гипоксии. Гипоксия, как известно, является фактором, индуцирующим генерацию свободных радикалов [6]. Плод и новорожденный подвержен повышенному риску оксидативного повреждения из-за дисбаланса в системе антиокислительной защиты, вызванного дефицитом энзимных и неэнзимных антиоксидантов [6, 13].
Учитывая эти факты, было установлено снижение антиокислительной активности супероксиддисмутазы и содержания α-токоферола в крови вены пуповины новорожденных от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности. Дефицит антиоксидантов в крови пуповины был ассоциирован с гиперпродукцией ТБК-активных продуктов, лизофосфатидилхолина и арахидоновой кислоты, что, возможно, усиливало гемолиз эритроцитов и гипоксическое повреждение тканей.
Таким образом, обнаружено усиление процессов пероксидации липидов при дефиците антиокислительной активности в крови пуповины новорожденных от ЦМВ-серопозитивных женщин с обострением инфекции в третьем триместре беременности, что является патогенетическим фактором нарушения структуры эритроцитов и метаболизма кислорода и согласуется с ранними нашими исследованиями [6].
1. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль Л.М. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой // Вопросы медицинской химии. 1987. Т. 33, №1. С.118–121.
2. Ишутина Н.А. Роль нарушений состава фосфолипидов в патогенезе цитомегаловирусной инфекции в период гестации // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра Сибирского Отделения Российской Академии Медицинских Наук. 2015. №3(103). С.52–55.
3. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: в 2-х т. М.: Мир, 1981. Т.1. С.52–115.
4. Ковальчук-Ковалевская О.В., Прокопенко В.М., Арутюнян А.В. Особенности перекисного окисления липидов и антиокислительной системы тромбоцитов у детей с задержкой внутриутробного развития // Журнал акушерства и женских болезней. 2010. Т.59, № 4. С.46–50.
5. Кореновский Ю.В., Горбенко Е.В., О.В. Ремнева, Фадеева Н.И., Ельчанинова С.А. Оксидативный стресс и антиоксидантная способность у недоношенных новорожденных с перинатальной гипоксией при рождении и на седьмые сутки // Сибирский медицинский журнал (Томск). 2007. Т.22, №1. С.19–22.
6. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина Н.А., Мироненко А.Г. Механизмы формирования гипоксии в период беременности и нарушение кровоснабжения плода при цитомегаловирусной инфекции // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 2015. T.70, №1. С.106–112. doi: 10.15690/vramn.v70i1.1239
7. Смирнова А.И., Россихина Е.В., Дюпина Н.С. Роль цитомегаловирусов в акушерской патологии и неонатологи // Вятский медицинский вестник. 2010. №4. С.41–47.
8. Титов В.Н., Лисицын Д.М. Жирные кислоты (физическая химия, биология и медицина). М.-Тверь: Триада, 2006. 670 с.
9. Cruz A., Padillo F.J., Tunez I., Muñoz C., Granados J., Pera-Madrazo C., Montilla P. Melatonin protects against renal oxidative stress after obstructive jaundice in rats // Eur. J. Pharmacol. 2001. Vol.425, №2. P.135–139. doi: 10.1002/jnr.21436
10. Hansen L.G., Warwick W.J. Fluorometric micro method for serum tocoferol // Tech. Bull. Regist. Med. Technol. 1966. Vol.36, №6. Р.131–136.
11. Jauniaux E., Burton G.J. The role of oxidative stress in placental-related diseases of pregnancy // J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod. (Paris). 2016. Vol.45, №8. P.775–785. doi: 10.1016/j.jgyn.2016.02.012
12. Mishra O.P., Delivoria-Papadopoulos M. Cellular mechanisms of hypoxic injury in the developing brain // Brain. Res. Bull. 1999. Vol.48, №3. P.233–238.
13. Swanson E.C., Schleiss M.R. Congenital cytomegalovirus infection: new prospects for prevention and therapy // Pediatr. Clin. North Am. 2013. Vol.60, №2. P.335–349. doi: 10.1016/j.pcl.2012.12.008
