сотрудник
, Россия
сотрудник
, Россия
сотрудник
, Россия
сотрудник
Москва, г. Москва и Московская область, Россия
ГРНТИ 68.41 Ветеринария
На сегодняшний день для лабораторных диагностических исследований при различных инфекционных заболеваниях животных широко применяют молекулярно-генетические методы анализа. В лекции отражены сведения об истории изобретения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ), сущности процессов, протекающих во время данной реакции, основные этапы ее постановки, особенности подготовки биологического материала для исследования в ПЦР-РВ. Представлен спектр возможностей использования метода ПЦР-РВ для качественного исследования биологического материала при подозрении на заражение животных некоторыми вирусными и бактериальными агентами, а также количественной оценки содержания вирусов в тканях, органах или в организме по аналогии с общепринятыми методами титрования инфекционности без непосредственной манипуляции с патогенными агентами. Количественный вариант ПЦР-РВ дает возможность ветеринарным врачам оценивать патогенетическую динамику развития заболевания, следить за эффектом антивирусной и антибактериальной терапии, отслеживать возникновение вариантов возбудителей с высокой резистентностью к используемым препаратам. Благодаря разработкам ВНИИЗЖ, качественный и количественный метод ПЦР-РВ в настоящее время можно использовать в отечественной ветеринарной науке и лабораторной практике для диагностики широкого спектра инфекционных заболеваний животных.
инфекционные болезни животных, диагностические исследования, обратная транскрипция, ПЦР в режиме реального времени
1. Mazlum A., Zhukov I.Yu., Aronova E.V., Igolkin A.S., Vlasova N.N., Metodicheskie rekomendacii po ocenke urovnya reprodukcii virusa afrikanskoj chumy` svinej s ispol`zovaniem PCzR v rezhime real`nogo vremeni [Guidelines for assessing the level of reproduction of African swine fever virus using real-time PCR], Vladimir, Federal Center for Animal Health, 2019, 19 p. (In russ.)
2. Patent RF № 2674076, 25.12.2017 Sposob opredeleniya titra infekcionnoj aktivnosti virusa yashhura v neinaktivirovannom sy`r`e dlya vakciny` s primeneniem metoda obratnoj transkripcii i polimeraznoj cepnoj reakcii v rezhime real`nogo vremeni, [Method for determining the titer of the infectious activity of the foot and mouth disease virus in non-inactivated raw materials for a vaccine using the method of reverse transcription and polymerase chain reaction in real time], Patent of Russia № 2017145889. (In russ.)
3. Abdul-Careem M.F., Hunter B.D., Nagy E., Read L.R., Sanei B. Spencer J.L., Development of a real-time PCR assay using SYBR Green chemistry for monitoring Marek’s disease virus genome load in feather tips, J. Virol. Methods, 2006, No. 133, pp. 34-40.
4. Boom R., Sol C.J., Heijtink R., Wertheim van Dillen P.M., Rapid and simple method for purification of nucleic acid, J. Clin. Microbiol., 1990, No. 28, pp. 495-593.
5. Hoffman B., Beer M., Reid S.M., Mertens P., Oura C.A., Van Rijn P.A., Slomka M.J., Banks J., Brown I.H., Alexander D.J. & King D.P., A review of RT-PCR technologies used in veterinary virology and disease control: sensitive and specific diagnosis of five livestock diseases notifiable to the World Organisation for Animal Health, Vet. Microbiol., 2009, No. 139 (1-2), pp. 1-23.
6. Hole K., Velazques-Salinas L. & Clavijo A., Improvement and optimization of a multiplex real time RT-PCR assay for the detection and typing of vesicular stomatitis virus, J. Vet. Diagn. Invest., 2010, No. 22, pp. 428-433.
7. Mackay I.M., Real-time PCR in the microbiology laboratory, Clin Microbiol Infect., 2004, No. 10, pp. 190-212.
8. Mackay I.M., Arden K.E., Nitsche A., Real-time PCR in virology, Nucleic Acids Res., 2002, No. 30, pp. 1292-1305.
9. OIE, Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th ed. Paris, 2018, 1834 p.
10. Peirson S.N., Butler J.N., Forster R.S., Experimental validation of novel and conventional approaches to quantitative real-time PCR data analysis, Nucleic Acids Res., 2003, No. 31, e73.
11. Read S.J., Recovery efficiencies on nucleic acid extraction kits as measured by quantitative LightCycler PCR, Mol. Pathol., 2001, No. 54, pp. 86-90.
12. Shaw A.E., Reid S.M., Ebert K., Hutchinks G.H., Ferris N.P. & King D.P., Protocol: Implementation of a one-step real-time RT-PCR protocol for diagnosis of foot-and-mouth disease, J. Virol. Methods, 2007, No. 143, pp. 81-85.
13. Wilson W.C., Letchworkth G.J., Jimenez C., Herrero M.V., Navarro R., Paz P., Cornish T.E., Smoliga G., Pauszek S.J., Dornak C., George M. & Rodriguez L.L., Field evaluation of a multiplex real-time reverse transcription polymerase chain reaction assay for detection of vesicular stomatitis virus, J. Vet. Diagn. Invest., 2009, No. 21, pp. 179-186.
