Аннотация (русский):
В современном мире все большую актуальность приобретает поиск инновационных подходов к разработке оздоровительных пищевых продуктов, богатых эссенциальными пищевыми нутрицевтиками. Микроводоросли, как источник биологически активных соединений, продемонстрировали высокий потенциал для удовлетворения потребностей населения с лечебно-профилактической и с экологической точек зрения. В статье проведен анализ основных нутрицевтиков микроводорослей (Arthrospira platensis (цианобактерия), Dunaliella salina, Diacronema lutheri, Tetraselmis viridis), предложены рецептуры пищевых композиций функциональной направленности с их применением (пищевая приправа для рыбных фаршей и концентрат киселя), даны рекомендации к употреблению в оздоровительных рационах питания.

Ключевые слова:
микроводоросли, цианобактерии, аквакультура, нутрицевтики, функциональные пищевые ингредиенты

Введение

К 2050 г. количество производимого в настоящее время продовольствия для удовлетворения потребности ожидаемого населения в 9,8 млрд человек должно удвоиться [1]. В настоящее время примерно один миллиард человек потребляет недостаточно белка; кроме того, по прогнозам, традиционных источников белка будет недостаточно [2]. Белки животного происхождения потребляются в большем количестве, чем растительные, однако, учитывая обостряющиеся экологические и этические проблемы, апогей популярности вегетарианства и веганства, спрос на растительный белок в мире постоянно увеличивается. Тенденцию усиливает ссылка ЮНЕП (United Nations Environment Program) на зоонозное происхождение большинства эпидемий и пандемий. Согласно заявлению Исполнительного директора ЮНЕП Ингер Андерсен: «… COVID-19 нанес серьезный ущерб здоровью человека, обществу и экономике во всех уголках мира. Это зоонозное заболевание, которое передается от животных к человеку. Оно может быть худшим, но оно не является первым. Мы уже знаем, что 60 процентов известных инфекционных заболеваний человека и 75 процентов всех новых инфекционных заболеваний имеют зоонозное происхождение» (Программа ООН по окружающей среде, июль 2020 г.). Микроводоросли, как источники белка и биологически активных соединений, продемонстрировали высокий потенциал для удовлетворения потребностей населения в устойчивом снабжении продовольствием; с экологической и лечебно-профилактической точки зрения обладают рядом преимуществ по сравнению с другим используемым сырьем. Следует отметить, что «микроводоросли» не являются таксономическим термином, это, скорее, понятие функционально-экологическое. В качестве последнего оно тождественно понятию «одноклеточные/монадные оксигенные фототрофы» [1; 3]. Первыми оксигенными фототрофами на Земле были сине-зеленые водоросли – цианобактерии, их относят к филу Cyanobacteria, домену (мегатаксону) Eubacteria. Все остальные микроводоросли (оксигенные фототрофы) относятся к домену Eucarya (эукариот) [3; 4].

Ещё менее 70 лет назад микроводоросли в контексте оздоровительного питания упоминались редко. В отличие от макрофитов почти ни один вид из микроводорослей не может быть собран в естественных популяциях в достаточном количестве; требуются технологии культивирования и сбора урожая биомассы для дальнейшего промышленного использования. Единственными микроводорослями, для которых существуют исторические свидетельства до 1900 г. о приеме их человеком в качестве пищи, являются цианобактерии рр. Nostoc и Arthrospira (=Spirulina). Наиболее известной и широко используемой в пищевой и кормовой промышленности является цианобактерия Arthrospira platensis Gomont, 1892 (=Spirulina platensis (Gomont) Geitler, 1925) [4]. Спирулина отличается высокой продуктивностью и пищевой ценностью, характеризуется «…типично белковой направленностью биосинтеза, содержит до 75% белка, имеет большие размеры клеток (до 500 мкм)» [5], является объектом культивирования, причем, при выращивании за счет изменения состава питательной среды, корректируется химический состав микроводоросли. Согласно недавнему рыночному отчету, опубликованному Credence Research, ожидается, что к 2023 г. мировой рынок спирулины будет демонстрировать среднегодовой темп роста 10% в текущем периоде и к 2026 г. будет оцениваться почти в 2000 млн долл. США из-за таких факторов как более широкое применение спирулины в косметике или недавнее одобрение фикоцианина в качестве естественного синего красителя для пищевых продуктов [6]. В России сегодня потребителю предлагается широкий ассортимент спирулины и БАД на ее основе от разных производителей: БАД Спирулина Splatensis (Китай), БАД Спирулина ВЭЛ (Индия), Elite Spirulina (Монголия), Long life (Китай), Now Spirulina (CША), Спирулина Алтэя, Altavita, ВЭЛ+селен (Россия) и др.; с повышенным содержанием микроэлементов выпускают таблетированную «Спирулину-Сочи НЦ-ВК» (ООО «Агро-Виктория», Россия), предлагают спирулину, законсервированную фруктозным сиропом «Спирулина Альга» и в виде экстракта с фруктозой «Рамикс» (НПО «Биосоляр» МГУ, Россия) и другие.

Перспективными объектами культивирования являются и такие микроводоросли как Chlorella vulgaris Beijerinck, 1890, Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco, 1905, Haematococcus pluvialis Flotow, 1844, Tetraselmis viridis (Rouchijajnen) R. E. Norris, Hori & Chihara, 1980 (=Platymonas viridis Rouchijajnen, 1966), Diacronema lutheri (Droop) Bendif & Véron, 2011 (=Pavlova lutheri (Droop) J. C. Green, 1975, =Monochrysis lutheri Droop, 1953), Isochrysis galbana Parke, 1949. Указанные микроводоросли являются ценным источником разнообразных нутрицевтиков и имеют статус GRAS (Generally Recognized as Safe – FDA) [6], их применяют для профилактики и лечения широкого круга заболеваний; тем не менее, некоторые из этих свойств еще должны быть подтверждены серьезными клиническими испытаниями. Использование биомассы микроводорослей или ее производных метаболитов стало инновационным подходом к разработке оздоровительных пищевых продуктов.

Цель исследований - изучение пищевой ценности и разработка пищевых композиций функциональной направленности с применением микроводорослей (Arthrospira platensis (цианобактерия), Dunaliella salina, Diacronema lutheri, Tetraselmis viridis).

 

Материалы и методы

Культуры микроводорослей D. salina, D. lutheri, T. viridis, A. platensis были предоставлены ФИЦ ИнБЮМ им. А.О. Ковалевского РАН из собственной коллекции. Выращивание микроводорослей проводили в 2022 г. в лабораторных условиях ФГБОУ ВО «КГМТУ», обеспечивающих альгологическую чистоту культуры, в стеклянных баллонах (10-литровых) [7], колбах, полиэтиленовых одноразовых пакетах с постоянной аэрацией с помощью компрессоров. Arthrospira platensis выращивали в открытых стеклянных аквариумах (среда Zarrouk). Среды готовили на фильтрованной и трижды термически пастеризованной, при 75-80°С, морской воде. Для приготовления питательной среды использовали химически чистые соли макро- и микроэлементов, согласно прописи [8]. Для наращивания инокулята применяли среду Гольдберга в модификации Кабановой, затем для интенсивного культивирования водорослей - более концентрированную среду Конвея с корректированием в процессе выращивания азота, фосфора и серы [8]. Культуру микроводоросли D. salina выращивали на модифицированной питательной среде, разработанной Shaish с соавторами [9]. Модификация заключалась в добавлении морской соли до концентрации в растворе 120 г/дм³. Изменение продукционных показателей биомассы водоросли, в зависимости от условий выращивания, изучали по динамике её абсолютных величин приростов.

При определении концентрации клеток микроводорослей использовали камеру Горяева и микроскопы Биолам ЛОМО, LCD Micro (объективы: х20, х40), фотосъемку проводили с помощью трихинеллоскопа с электронным выводом изображения «СТЕЙК V вар.3» (увеличение 10-200).

В условиях эксперимента, в период с мая по октябрь, в интенсивной культуре А. platensis плотность биомассы составляла 2,5 г/л (8,0% влаги). Концентрация D. salina в суспензии составляла 20-40 млн клеток в 1 мл (продуктивность культуры - 0,5-0,7 г а.с.в./л). При интенсивном режиме выращивания (с подачей CO₂) концентрация суспензии D. lutheri составляла 400-700 млн кл./мл (продуктивность - 0,5-1,0 г а.с.в./л). Продуктивность, выращенной нами культуры микроводоросли T. viridis, достигала 0,4-0,6 г а.с.в./л.

Исследования химического состава проводили с применением стандартных методов, принятых в комплексном химическом анализе: общее содержание азотистых веществ – по методу Къельдаля с применением автоазотоанализатора фирмы FOSS; минеральных веществ – гравиметрически, после сжигания при температуре 600-700^оС, состав макро- и микроэлементов – методом капиллярного электрофореза; определение аминокислот – методом капиллярного электрофореза Капель 205М; жирнокислотный состав – методом газо-жидкостной хроматографии ГХ Кристалл 2000М. Оценку биологической ценности белков проводили по методу H.H. Mitchell & R.J. Block [10], в соответствии с которым рассчитывается показатель аминокислотного скора.

 

Результаты и обсуждение

Многочисленные биологически активные соединения микроводорослей, являющихся объектом исследования, по своему биохимическому составу и физиологической активности дополняют друг друга (табл. 1).

 

Таблица 1. Микроводоросли и их биологически активные соединения / Table 1. Microalgae and their biologically active compounds

Микроводоросли	Биологически активные соединения	Источник
Arthrospira platensis Gomont, 1892	Фикобилипротеины: фикоцианин, аллофикоцианин ПНЖК: g-линоленовая, α-линоленовая, линолевая, стеаридоновая, эйкозапентаеновая, докозагексаеновая и арахидоновая Хлорофилл а, b Витамины и каротиноиды: В1, В2, В3, В6, В9, B12, С, D и Е, β-каротин, лютеин, астаксантин Сульфатированные полисахариды	[17, 18, 19]   [20, 21]     [6, 22, 23]   [24]
Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco, 1905	Витамины и каротиноиды: β-каротин, хлорофилл а и b, astaxanthin, зеаксантин, кантаксантин, фитоен, фитофлюен, криптоксантин, витамины А, D, E, B1, B2, B3, B6, B9, C ПНЖК: α-линоленовая кислота, олеиновая кислота, эруковая кислота Фитостеролы: брассикастерин, цитостерол, сигмастерол Фенольные соединения: α- и β-ионона, неофитадиен, фитол Минеральные вещества: селен, железо, магний	[6, 20, 22, 25, 26]     [20-22]   [6, 27]   [28, 29]   [30]
Diacronema lutheri (Droop) Bendif & Véron, 2011	Витамины и каротиноиды: витамин В2, PP, β-каротин ПНЖК: линолевая, α-линоленовая кислота, докозагексаеновая кислота, эйкозапентаеновая кислота, арахидоновая	[20, 21]
Tetraselmis viridis (Rouchijajnen) R. E. Norris, Hori & Chihara, 1980	Витамины и каротиноиды: витамин С, β-каротин Производные ароматических углеводородов: фенолкарбоновые кислоты ПНЖК: линолевая кислота, эйкозапентаеновая кислота, γ- и α-линоленовая кислота, олеиновая кислота, арахидоновая кислота Органические кислоты Экзополисахариды	[31] [32]   [21]     [33] [31]

 

Сине-зеленая водоросль (цианобактерия) Arthrospira platensis Gomont, 1892 (сем. Microcoleaceae) является всемирным лидером среди растений по своему составу и свойствам (рис. 1,2). Известны способы получения обогащенной биомассы спирулины цинком, хромом, селеном [11-13], а также - способы выделения фикоцианина и фикобилипротеинов [14-16]. Фикоцианин, выделенный из цианобактерий, является водорастворимым, нетоксичным флуоресцентным белком с сильными антиоксидантными, противовоспалительными и противоопухолевыми свойствами. На основе фикоцианина разработан новый термостабильный препарат с антиоксидантными свойствами, благодаря наличию в его составе антиоксидантного энзима супероксиддисмутазы (СОД) и фикоцианина белкового пигмента со способностью нейтрализовать негативное воздействие свободных радикалов. Важным является тот факт, что антиоксиданты, полученные из натуральных источников, являются более эффективными по сравнению с синтезированными химическим путем [15, 16].

 

Рисунок 1. Цианобактерия Arthrospira platensis Gomont (1892) (сентябрь, 2022) Figure 1. Cyanobacteria Arthrospira platensis Gomont (September, 2022)	Рисунок 2. Измельченная сине-зеленая Водоросль A. platensis Gomont (1892) Figure 2. Crushed blue green Alga A. platensis Gomont (1892)

 

Еще одной особенностью биохимического состава спирулины является значительное содержание сульфатированных полисахаридов, отличающихся высокой биологической активностью: они оказывают угнетающее действие на РНК- и ДНК-содержащие вирусы, обладают селективным ингибирующим действием на вирус иммунодефицита человека, противомикробной, антикоагулянтной, осморегулирующей активностью. Сульфатированные полисахариды, наряду с гликопротеидами, являются основой противоопухолевых препаратов, получаемых из водорослей [24; 31].

Сушеная спирулина (рис. 2) используется в качестве улучшителей свойств теста, продлевает сроки хранения, а также повышает качество готовых хлебобулочных изделий, их биологическую ценность [34; 35], в пивоварении спирулина применяется как препарат для интенсификации брожения [36], в молочной промышленности с участием спирулины получают безалкогольный лечебно-профилактический напиток, показанный при гастроэнтерологических заболеваниях и расширяющий ассортимент лечебных напитков на основе молочной сыворотки (в данном случае спирулина используется в виде наполнителя) [37].

В отличие от А. platensis, произрастающей в пресной и солоноватоводной среде, следующие три вида являются представителями морской биоты.

Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco, 1905 – галофильная микроводоросль (класс Chlorophyceae) (рис. 3), способная синтезировать целый ряд соединений (табл. 1), среди которых особый интерес вызывает группа каротиноидов, обладающих антиоксидантной активностью; высокая концентрация β-каротина (до 60-70% общего содержания) обуславливает оранжево-красный оттенок одноклеточной водоросли и защищает от интенсивного света [30]. Благодаря богатому составу каротиноидов, D. salina используется в качестве биологически активной добавки как общеукрепляющее и профилактическое средство [38]. К особенности строения микроводоросли и, как следствие, легкой перевариваемости, следует отнести отсутствие клеточной стенки, в этом случае от осмотического давления клетку, произрастающую в условиях повышенной солености (до 10%), защищает высокое содержание глицерина [39].

Фитостеролы микроводорослей и D. salina, в частности, известны благодаря их способности снижать уровень холестерина ЛПНП (более чем на 15%) и способствовать здоровью сердечно-сосудистой системы [40]. Кроме того, сообщалось, что фитостеролы участвуют в противовоспалительной и антиатерогенной, противораковой и антиоксидантной активности [41] и могут обеспечивать защиту от расстройств нервной системы, таких как аутоиммунный энцефаломиелит, боковой амиотрофический склероз или болезнь Альцгеймера [27].

Биологические функции фенольных соединений, также присутствующих в микроводорослях, очень разнообразны, обладают антиоксидантной, противовоспалительной, антимикробной активностью, замедляют прогрессирование некоторых видов рака и снижают риск сердечно-сосудистых заболеваний, нейродегенеративных заболеваний и диабета [6; 28; 42].

D. salina нашла применение в пищевой промышленности, например, при разработке рецептур желейного мармелада. Внесение спиртового экстракта микроводоросли не только повышает антиоксидантную активность мармелада, но и придает ему изумрудно-зеленую окраску и позволяет исключить применение искусственных красителей [30].

Diacronema lutheri (Droop) Bendif & Véron, 2011 – жгутиковая подвижная микроводоросль (класс Pavlovophyceae), отличается липидной направленностью биосинтеза, особенно способностью к образованию ПНЖК (табл. 1) [43]. Следует отметить, что интерес к микроводорослям, как альтернативному источнику ПНЖК, растет, вероятно, из-за отсутствия специфического запаха, неприятного вкуса, токсических соединений, присущих порой традиционному источнику ПНКЖ – рыбьему жиру. В сухом веществе клеток D. lutheri, в зависимости от условий выращивания, может содержаться от 22 до 40% липидов.

Tetraselmis viridis (Rouchijajnen) R. E. Norris, Hori & Chihara, 1980 – морская зеленая жгутиковая микроводоросль (класс Chlorodendrophyceae), богатая белком и высокомолекулярными жирными кислотами (рис. 4). Почти все культивируемые морские виды водорослей содержат в своем составе докозагексаеновую и эйкозапентаеновую жирные кислоты, за исключением Dunaliella, у Tetraselmis присутствует только эйкозапентаеновая кислота (табл. 1). На основе биомассы T. viridis разработана БАД, «…выявлена антиоксидантаная активность, обусловленная наличием β-каротина, витамина С, хлорофилла и органических кислот» [31]. Положительной особенностью строения является отсутствие у ее клеток плотной оболочки [6; 22], благодаря чему культуры T. chui, T. suecica и T. tetrahele широко используются в качестве корма в аквакультуре [44].

 

Рисунок 3. Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco (1905) (сентябрь, 2022) Figure 2. Green microalgae Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco (1905) (September, 2022)	Рисунок 4. Зеленая водоросль Tetraselmis viridis (Rouchijajnen) R. E. Norris, Hori & Chihara (1980) (октябрь, 2022) Figure 4. Green microalgae Tetraselmis viridis (Rouchijajnen) R. E. Norris, Hori & Chihara (1980) (October, 2022)

 

Культивирование микроводорослей в основном осуществляется в автотрофном режиме с использованием, в качестве источника, энергии света, однако водоросли могут культивироваться и в гетеротрофных условиях, проявляя при этом антибактериальную активность и пробиотические свойства, которые могут усиливаться при изменении трофических условий. Так, гетеротрофная культура T. suecica имеет следующие преимущества перед автотрофной: увеличение выхода экзополисахаридов (ЭПС) (в 4 раза), более высокая антиоксидантная способность ЭПС, в то же время «…концентрация каротиноидов и хлорофиллов а и в значительно снижается (до 12 и 1%, соответственно; p<0,05), что объясняется отсутствием света в гетеротрофных культурах» [45]. Антиоксидантная активность может быть связана с процентным содержанием галактуроновой и глюкуроновой кислот, присутствующих в составе ЭПС микроводорослей. Гетеротрофные ЭПС имели в своем составе сульфат, содержание сульфатов и уроновых кислот связывают, согласно Mendiola et al. [46] и Sun et al. [47], с увеличением восстанавливающей способности свободных радикалов [48].

Морские микроводоросли, богатые фитосоединениями, такими как фитостеролы, ПНЖК, каротиноиды, полисахариды, витамины и другими, проявляют выраженные антиоксидантные и антиканцерогенные свойства, что позволяет предложить больше преимуществ при их использовании в качестве возможных натуральных нутрицевтиков для фармацевтической промышленности и функциональных пищевых ингредиентов [45].

Химический состав биомассы микроводорослей представлен в таблице 2. A. platensis, выращенная в лабораторных условиях, характеризуется высоким содержанием белка (до 60%), аминокислотный состав включает все незаменимые аминокислоты (табл. 3); наряду с другими аминокислотами в белках спирулины содержится довольно много таурина, эта непротеиногенная серосодержащая аминокислота считается условно необходимой и выполняет разнообразные физиологические функции: участвует в осморегуляции, стабилизации клеточных мембран, гомеостазе кальция, нейромодуляции, энергетическом метаболизме и др. [49-52].

 

Таблица 2. Содержание макронутриентов микроводорослей / Table 2. Macronutrient content of microalgae

Объект исследований	Массовая доля, %, среднее ± SD; n = 3
	белка	липидов	углеводов
Arthrospira platensis	58,2 ± 0,2	3,9 ± 0,2	24,2 ± 0,4
Diacronema lutheri	30,2 ±0,4	33,2 ± 0,1	16,7 ± 0,4
Tetraselmis viridis	19,2 ± 0,3	38,0 ± 0,1	10,0 ± 0,1
Dunaliella salina	34,0 ± 0,2	22,8 ± 0,1	18,2 ± 0,2

 

Таблица 3. Аминокислотный состав белка A. platensis / Table 3. Amino acid composition of the protein A. platensis

Название аминокислоты	Содержание, г/100 г белка	Содержание в идеальном белке, г/100 г (ФАО/ВОЗ, 2013)	Аминокислотный скор, %
Валин	5,6	4,0	140
Изолейцин	3,8	3,0	127
Лейцин	8,4	6,1	138
Лизин	5,4	4,8	113
Метионин + Цистин	2,3 + 0,4	2,3	117
Треонин	5,7	2,5	228
Триптофан	1,0	0,66	152
Фенилаланин + Тирозин	4,5 + 3,9	4,1	205
Гистидин	3,5	1,6	219
Аланин	5,2	-	-
Аргинин	5,6	-	-
Аспарагиновая кислота	9,1	-	-
Глицин	5,6	-	-
Глутамин	12,7	-	-
Серин	4,6	-	-
Таурин	2,6	-	-
Биологическая ценность, %	53,0
Коэффициент утилитарности аминокислотного состава, U, U®1	0,7
Показатель сопоставимой избыточности, σс	10,2

 

Результаты анализа жирнокислотного состава свидетельствуют о его значительном различии для культивируемых микроводорослей (табл. 4). С изменением условий среды при культивировании, прежде всего температуры, доля эссенциальных жирных кислот может существенно меняться, и это отражается на их биологической ценности [53; 54].

 

Таблица 4. Жирнокислотный состав липидов микроводорослей / Table 4. Fatty acid composition of microalgae lipids

Жирные кислоты	Наименование микроводорослей
	Diacronema lutheri [53]	Tetraselmis sp. [21]	Dunaliella salina [55]
12:0	-	0,01± 0,01	0,37±0,05
14:0	0,3±0,1	0,17 ± 0,05	1,60±0,10
14:1 ω5	0,1±0,1	1,01 ±0,16	0,07±0,01
15:0	0,4±0,1	-	0,09±0,01
15:1 ω5	0,1±0,1	-	0,29±0,01
16:0	28,1 ±3,4	23,29 ±1,0	45,41±0,35
16:1 ω7	4,0±0,6	1,96±0,32	0,25±0,06
16:1 ω 9	17,0±2,3	-	-
16:2 ω 6	0,1±0,1	-	-
16:3	0,2±0,1	3,44±0,18	-
16:4	0,1±0,1	17,16±1,57	-
17:0	0,2±0,1	-	0,19±0,02
17:1 ω7	-	-
17:1 ω9	1,8±0,2	-	0,49±0,06
18:0	2,1±1,0	-	1,65±0,43
18:1 ω 7	3,1±0,3	-	-
18:1 ω 9	5,6±1,0	12,11±0,32	11.69±0,06
18:1 ω11	-	-	6,78±0,03
18:2 ω 6	10,6±1,8	12,81±0,57	9,87±0,01
18:3 ω 6 (GLA)	-	0,74±0,06	-
18:3 ω 3(ALA)	10,2 ±3,6	13,99±0,4	21,19±0,10
18:4 ω 3	0,2±0,1	3,62±0,05
20:0	0,1±0,1	-	0,11±0,01
20:1 ω 9	-	1,50±0,05	-
20:1 ω 7	0,1±0,1	-	-
20:2 ω 6	0,2±0,1	0,21 ± 0,18	-
20:3 ω 6	0,2±0,1	-	-
20:4 ω 6	следы	-	-
20:4 ω 3	-	1,65±0,12	-
20:5 ω 3	10,1±2,1	6,10±0,49	-
22:4 ω 6	-	-	-
22:0	0,3±0,1	-	-
22:6 ω 3	1,4±0,3	-	-
∑НЖК	31,5±4,9	23,47±1,01	49,42±0,09
∑МНЖК	31,8±4,7	16,57±0,71	19,55±0,08
∑ПНЖК	33,3±8,0	59,72±1,53	31,06±0,12
∑ ω3 ЖК	21,9±2,7	25,36±0,73	21,19±0,1
∑ ω6 ЖК	10,9±2,61	13,76±3,95	9,87±0,01
ω6/ω3	0,49	0,54	0,47

 

«…По данным ООН, каждый человек на планете потребляет в среднем 16 кг рыбы и морепродуктов в год, включая аквакультуру. Среднее содержание ЭПК+ДГК в биомассе рыб и беспозвоночных составляет 2 мг на 1 г (Gladyshev et al., 2009). Отсюда легко подсчитать, что ежесуточное среднее потребление ЭПК+ДГК человеком составляет около 0,1 г» [56]. Рекомендуемое ежесуточное потребление w-3 для взрослых составляет около 1000 мг, минимальное – 250 мг, для детей с 14 лет значения РСП выше – 1200-1600 мг. Дефицит физиологически важных ПНЖК в питании человечества очевиден.

Нами предложено введение трех микроводорослей в рецептуру растительной функционально-пищевой композиции (ФПК) (табл. 5), сочетание ингредиентов получено с помощью математического моделирования, уточнения, с целью получения приемлемых органолептических характеристик продукта, внесены в результате эксперимента; при разработке модели учитывались значения основных нутриентов и жирно-кислотный состав липидов (соотношение НЖК:МНЖК:ПНЖК и w6:w3), позволяющее максимально сбалансировать питательность композиции. Выбор таких ингредиентов как зелень сушеного укропа, мускатный орех и кориандр позволили придать ФПК насыщенный аромат и вкус, в то же время их концентрация не придавала резкого избыточного привкуса и запаха готовой продукции.

 

Таблица 5. Рецептура растительной функциональной пищевой композиции (ФПК) /

Table 5. Recipe of a vegetable functional food composition

Соотношение ингредиентов ФПК, %
Diacronema luther	Tetraselmis viridis	Dunaliella salina	Кориандр	Мускатный орех	Укроп сушеный
22,5	21,9	14,9	10,5	6,8	23,3

 

Для подготовки микроводорослей к введению их в ФПК, полученную биомассу промывали дистиллированной водой, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10-15 мин, отделяли супернатант, осадок (водорослевую массу) высушивали (вакуумная сушка) и измельчали. Содержание морской соли, в сушеных водорослях, не должно превышать 8%.

ФПК предназначена для введения, в количестве 15%, в фаршевые формованные изделия, например, в рыбные хлебцы из хека, минтая, бычка. ФПК позволит обогатить рыбный фарш легкоусвояемым белком, липидами (ПНЖК 9% общего содержания в липидах), витаминами и углеводами, заменить поваренную соль морской, снизив содержание хлористого натрия - 77,5-97,7% против 99,5-99,7% в поваренной соли. ФПК придает необычный внешний вид готовому кулинарному изделию, окрашивая его в зеленоватый цвет. Энергетическая ценность ФПК составляет 364 кКал/100 г (табл. 6).

 

Таблица 6. Пищевая ценность функциональной пищевой композиции / Table 6. Chemical composition of the functional food composition

Наименование продукта	Массовая доля, %
	белок	углеводы, вкл. клетчатку	жир
ФПК с микроводорослями	18,4 ± 0,5	19,3 ± 0,2	23,6 ± 0,1

 

Разработан также ассортиментный ряд сухого напитка киселя, обогащенного спирулиной (табл. 7). Употребление 250 мл напитка позволяет восполнить рацион белком (6,0% РСП), железом (12-15% РСП), медью (45% РСП), селеном (1% РСП), витаминам В₁ (12% РСП) и В₂. (15% РСП), при СД II рекомендуется напиток со спирулиной и топинамбуром (без сахара). В качестве рекомендации, для улучшения вкуса предлагается введение сухого вина (11 об.%) из расчета 125 мл на 1,0 л напитка.

Введение пектина позволяет придать напитку детоксицирующие свойства и снизить калорийность продукта, по сравнению с традиционным введением крахмала, в 5,7-5,8 раз.

 

Таблица 7. Рецептуры концентратов киселя, обогащенного спирулиной / Table 7. Kissel concentrate recipes enriched with spirulina

Наименование компонента	Масса компонента, кг на 100 кг смеси для концентрата киселя со спирулиной
	яблоком и имбирем	абрикосом	виноградом и яблоком	киви и бананом	топинамбуром	морковью
Концентрат сушеный яблока	8,80	-	3,25	-	5,50	-
Концентрат сушеный абрикоса	-	7,00	-	-	-	-
Концентрат сушеный винограда	-	-	6,05	-	-	-
Концентрат сушеный киви	-	-	-	3,25	-	-
Концентрат сушеный банана	-	-	-	6,05	-	-
Спирулина измельченная	30,00	30,00	30,00	30,00	30,00	35,00
Абрикосы сушеные кусочками	-	5,00	-	-	-	-
Сушеный измельченный имбирь	0,50	-	-	-	0,50	-
Сушеный измельченный топинамбур	-	-	-	-	12,00	-
Сушеная измельченная столовая морковь	-	-	-	-	-	12,00
Сушеная измельченная зелень укропа*	-	-	-	-	0,50	0,30
Сахар белый кристаллический	50,20	47,50	50,20	50,20	-	0,20
Соль пищевая	-	-	-	-	0,30	0,30
Пектин	10,00	10,00	10,00	10,00	15,00	10,00
Овсяное толокно	-	-	-	-	30,70	31,20
Мука льняная	-	-	-	-	5,00	10,50
Лимонная кислота	0,50	0,50	0,50	0,50	0,50	0,50

 

Заключение

Использование микроводорослей, в качестве источника ценных биологически активных соединений, в пищевой промышленности сопряжено с некоторыми трудностями, главным образом из-за недостаточно развитых технологий и процессов, связанных с выращиванием и переработкой микроводорослей, что требует, в свою очередь, увеличения инвестирования в исследования и организацию производства по культивированию и переработке микроводорослей. В последние годы большой интерес вызвала возможность использования микроводорослей и их метаболитов для инновационных нутрицевтиков, функциональных пищевых ингредиентов и обогащающих пищевых композиций.

В работе исследована пищевая ценность водорослей Dunaliella salina, Diacronema luther, Tetraselmis viridis, Arthrospira platensis, разработаны варианты использования микроводорослей в качестве ингредиентов в пищевых композициях с потенциальной пользой для здоровья. Антиоксидантная, гипотензивная, иммуномодулирующая, противораковая и гепатопротекторная активность некоторых соединений, полученных из микроводорослей, их высокая усвояемость, а также возможность искусственного массового выращивания предопределяют дальнейший интерес к выбранным объектам исследований.

 

Работа выполнена в рамках научного проекта «Разработка технологии функциональных пищевых композиций из микро- и макрофитов» (рег. Номер 122082200077-5).

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад в работу авторов: Л.В. Донченко – идея работы, подготовка заключения, окончательная проверка статьи; О.Е. Битютская – подготовка введения, анализ данных, технологическая часть, подготовка статьи; Н.В. Сокол – сбор и анализ литературных данных, вопросы апробации, подготовка статьи; Л.И. Булли – культивирование микроводорослей, сбор и анализ данных, подготовка статьи; Л.М. Есина – вопросы соответствия требованиям безопасности и качества, подготовка статьи; Н.Ф. Мазалова - подготовка и анализ базы данных, технологическая часть, подготовка статьи; О.В. Никитенко – сбор и анализ данных, подготовка статьи.

 

The work was carried out within the framework of the scientific project "Development of technology of functional food compositions from micro- and macrophytes" (reg. Number 122082200077-5).

The authors declare that there is no conflict of interest.

Contribution to the work of the authors: L.V. Donchenko – the idea of the work, preparation of the conclusion, final verification of the article; O.E. Bityutskaya – preparation of the introduction, data analysis, technological part, preparation of the article; N.V. Sokol – collection and analysis of literary data, issues of approbation, preparation of the article; L.I. Bulli – cultivation of microalgae, data collection and analysis, article preparation; L.M. Esina – issues of compliance with safety and quality requirements, article preparation; N.F. Mazalova –  database preparation and analysis, technological part, article preparation; O.V. Nikitenko – data collection and analysis, article preparation.

1. Caporgno M.P. Trends in Microalgae Incorportion into Innovative Food Products with Potential Health Benefits / Martin P. Caporgno, Alexander Mathys // Frontiers in Nutrition. – 2018. – Vol. 5. – Pp. 2-10. DOI: 10.3389/fnut.2018.00058.

2. Production and supply of high-quality food protein for human consumption: sustainability, challenges, and innovations / G. Wu, J. Fanzo, D.D. Miller, P. Pingali, M. Post, J. L. Steiner, A.E. Thalacker-Mercer // Ann N Y Acad. Sci. – 2014. – 1321 – Pp.1-19. DOI: 10.1111/nyas. 12500.

3. Микроводоросли Черного моря: проблемы сохранения биоразнообразия и биотехнологического использования / Под ред. Ю. Н. Токарева, 3. 3. Финенко, Н. В. Шадрина; НАН Украины, Институт биологии южных морей. – Севастополь: ЭКОСИ-Гидрофизика, 2008. – 454 с.

4. Guiry M. D. Algae Base. Всемирная Электронная публикация / Guiry M. D. & Guiry GM. – Национальный университет Ирландии, Голуэй. – 2020. – URL: https://www.algaebase.org.

5. Гнатченко Л. Г. Опыт интенсивного выращивания микроводоросли спирулины (Spirulina platensis) / Л. Г. Гнатченко, И. И. Писаревская, А. П. Иванюта // Труды ЮгНИРО. – 1994. – Т. 40. – С. 106-110.

6. Garcia J.L. Microalgae, old sustainable food and fashion nutraceuticals / Jose L. Garcia, Marta de Vicente, Beatriz Galan // Microbial Biotechnology. – 2017. – Vol. 10. – pp. 1017–1024. URL: https://doi.org/10.1111/1751-7915.12800.

7. Sorgebous L.P. Manual of the production and use of live food for aquaculture / L. P Sorgebous. – Rome : FAO, 1996. – 295 p. (FAO Fisheries Technical Paper; no. 361).

8. Инструкция по массовому разведению морских одноклеточных водорослей и коловраток / Л. В. Спекторова, С. Л. Паньков, Е. С. Проскурина, С. В. Шершов, [и др.]. – М.: ВНИРО, 1986. – 63 с.

9. Shaish A. Effect of inhibitors on the formation of stereoisomers in the biosynthesis of β-carotene in Dunaliella bardawil / A. Shaish, M. Avron & A. Ben-Amotz // Plant and cell physiology, 1990. – 31(5). – pp. 689–696. DOI: 10.1093/oxfordjournals.pcp.a077964.

10. Mitchell H.H. Some relationships between the amino acid contents of proteins and their nutritive values for the rat / H. H. Mitchell, R. J. Block // J. biol. Chem. –1946. – 69(4). – pp. 387–91. DOI:10.1093/jn/69.4.387.

11. Пат. 2320195 Российская Федерация, МПК A23J3/20, A23J3/32, C12N1/12, C09B061/00. Способ получения белкового препарата из цианобактерий / Мазо В. К., Гмошинский И. В.; заявитель и патентообладатель: В. К. Мазо. – № 2006118740/13; заявл. 31.05.2006; опубл. 27.03.2008. – Бюл. № 9.

12. Пат. 2277124 Российская Федерация, МПК C12N1/12, C12R1/89. Cпособ получения обогащенной цинком биомассы спирулины (Spirulina platensis) [Текст] / Попова Виктория Викторовна (RU), Пронина Наталья Александровна (RU), Налимова Анна Александровна (RU), и [др.]; патентообладатель: Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской Академии Наук (RU). – № 2004136239/13; заявл. 10.12.2004; опубл. 27.05.2006. – Бюл. № 22.

13. Пат. 2199582 Российская Федерация, C12N1/12, A61K33/04, A23L1/337, C12N1/12, C12R1:89. Способ получения обогащенной селеном биомассы спирулины (Spirulina platensis) / Пронина Н. А., Ковшова Ю. И., Попова В. В., и [др.]; патентообладатель: Институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева Российской Академии Наук (RU). – № 2000126580/13; заявл. 24.10.2000; опубл. 27.02.2003. – Бюл. № 6.

14. Береговая Н.М. Способы получения и использования С-фикоцианина (обзор) / Н.М. Береговая // Экология моря.  2010.  Спец. вып. 80.  С. 12-16.

15. Рудик В. Способ получения фикоцианина из Spirulina platensis (Nordst.) Geitl. / В. Рудик, В. Бульмага // Альгология. – 2000. – 10, № 2. – С. 350-354.

16. Пат. 3781 MD, C12N1/12. Способ получения антиокисдантного термостабильного препарата из биомассы цианобактерии Spirulina platensis / Рудик В., Бульмага В., Ефремова Н. (MD). – Заявлено 18.03.2008, BOPI nr. 12/2008. Дата выдачи патента 2009.08.31. . – URL : http://aitt.asm.md/files/tmp/366.384.40_Procedeu_nou_de_obээinere_a_preparatului_antioxidant_rus [1].

17. Antioxidant and anti-inflammatory properties of C-phycocyanin from blue-green algae C. Romay, J. Armesto, D. Remirez, R. González, N. Ledon, I. García // Inflamm Res. – 1998. – 47(1). – Pp. 36-41. DOI: 10.1007/s000110050256.

18. Hirata, T. Antioxidant activities of phycocyanobillin prepared from Spirulina platensis / T. Hirata, M. Tanaki, M. Ooike, T. Tsunomura, M. Sagakuchi // J. Appl. Phycol. – 2000. – Vol. 3. – Pp. 435-439.

19. Sonani R.R. Recent advances in production, purification and applications of phycobiliproteins / R.R. Sonani, R.P. Rastogi, R. Patel & D. Madamwar // World Journal of Biological Chemistry. – 2016. – 7(1). – Pp. 100-109. – URL: http://dx.doi.org/10.4331/wjbc.v7.i1.100. PMid:26981199.

20. Pereira C.S. Phosphoenolpyruvate phosphotransferase system regulates detection and processing of the quorum sensing signal autoinducer-2 / C. S. Pereira, A. J. Santos, M. Bejerano-Sagie, P.B. Correia, J.C. Marques and K. B. Xavier // Mol. Microbiol. – 2012. – 84. – Pp. 93-104. DOI: 10.1111/j.1365-2958.2012.08010.x.

21. Effects of long chain fatty acid synthesis and associated gene expression in microalga Tetraselmis sp. / T. C. Adarme-Vega, S. R. Thomas-Hall, D. K. Lim and P. M. Schenk // Mar. Drugs. – 2014. – 12. – Pp. 3381-3398. DOI: 10.3390/md12063381.

22. Bishop W.M. Evaluation of microalgae for use as nutraceuticals and nutritional supplements / W.M. Bishop and H.M. Zubeck // J. Nutr. Food Sci. – 2012. – 2. – Pp. 147. DOI: 10.4172/2155-9600.1000147.

23. Sun M. Phylogeny of the Rosidae: A dense taxon sampling analysis / M. Sun, R. Naeem, J. X. Su, Z. Y. Cao, J. G. Burleigh, P. S. Soltis, D. E. Soltis & Z.D. Chen // Journal of Systematics and Evolution. – 2016. – 54(4). – Pp. 363-391.

24. Разработка методов выделения из гидробионтов БАВ радиозащитного и инсулиноподобного действия: отчет о НИР / ЮгНИРО; рук-ль темы № 12: А.Г. Губанова; исполн.: Г.С. Христоферзен, Л.Я. Полищук, Л.П. Борисова, О.Е. Битютская, и [др.]. – Керчь: Изд-во ЮгНИРО, 1994. – 71 с. – Библиогр.: с. 66-71. – № ГР 78020859. – Инв. Б-814808.

25. Верушкина О.А. Аральский штамм микроводоросли Dunaliella salina AR-1 как источник биологически активных веществ / О.А. Верушкина, Е.Н. Баймурзаев, А.К. Тонких // Universum: химия и биология: электрон. научн. журн. – 2022. – 5(95). – URL: https://7universum.com/ru/nature/archive/item/1358.

26. Henríquez, V. Carotenoids in microalgae / V. Henríquez, C. Escobar, J. Galarza and J. Gimpel // Subcell Biochem. – 2016. – 79. – Pp. 219-237.

27. Luo X. Advances in microalgae-derived phytosterols for functional food and pharmaceutical applications / X. Luo, P. Su, W. Zhang // Mar Drugs. – 2015. – Vol. 13. – Pp. 4231-4254.

28. Plaza M. Screening for bioactive compounds from algae / M. Plaza, S. Santoyo, L. Jaime, G.-B. Reina, G., M. Herrero, F. J. Señoráns, E. Ibáñez // J. Pharm. Biomed. Anal. – 2010. – 51 (2). –Pp. 450-455. – URL : https://doi.org/10.1016/j.jpba.2009.03.016.

29. Biologically Active Metabolites Synthesized by Microalgae / Michele Greque de Morais, Bruna da Silva Vaz, Etiele Greque de Morais, and Jorge Alberto Vieira Costa // BioMed Research Internationa. – 2015. – Article ID 835761. – URL : https://doi.org/10.1155/2015/835761.

30. Использование экстракта микроводоросли Dunaliella salina в технологии желейно-фруктового мармелада / Е.А. Кузнецова, Я. Бриндза, Е.В. Климова, А.Б. Боровков и другие // Индустрия питания. – 2019. – Т. 4  №2. – C. 14-17.

31. Разработка препарата биологически активной добавки на основе биомассы водоросли Tetraselmis viridis / Е.А. Кузнецова, В.А. Гаврилина, Е.В. Климова., Я. Бриндза и другие // Tехнология и товароведение инновационных пищевых продуктов. – 2021. – № 3. – С. 46-50.

32. Шалыго Н. Медицинские аспекты альгологии / Николай Шалыго // Наука и инновации. – 2018. – № 2(180). – С. 20-23. – URL : https://cyberleninka.ru/article/n/meditsinskie-aspekty-algologii/viewer.

33. Comparative effects of biomass pre-treatments for direct and indirect transesterification to enhance microalgal lipid recovery / Naghdi, F. G., Thomas-Hall S. R., Durairatnam R., Pratt S., Schenk P. M. // ORIGINAL RESEARCH article Front. Energy Res., 04 December 2014. Sec. Bioenergy and Biofuels. – URL: https://doi.org/10.3389/fenrg.2014.00057.

34. Пат. 2450522 Российская Федерация, МПК A21D2/36, A21D8/02. Способ производства хлебобулочных изделий для профилактического питания / Белявская Ирина Георгиевна (RU), Лямин Михаил Яковлевич (RU), Черных Валерий Яковлевич (RU), Гришина Лариса Николаевна (RU); патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств» (RU). – № 2010148012/13; заявл. 25.11.2010; опубл. 20.05.2012. – URL: http://ru-patent.info/24/50/2450522.html.

35. Технология пищевых продуктов функционального назначения: монография / А.А. Мазараки, М.И. Пересычный, М. Ф. Кравченко, и [др.]; под ред. д-ра техн. наук проф. М. И. Пересычного. – 2-е изд. – К.: Киев. нац. торг.-экон. ун-т, 2012. – 1116 с. (украинский язык).

36. Бидихова М. Э. Интенсификация брожения в пивоварении с использованием препарата Spirulina platensis: автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. техн. наук (05.18.07) / Бидихова Марина Эльбрусовна – Москва, 2003.  182 c.

37. Пат. 2321272 Российская Федерация, МПК A23L1/337 A23L1/09. Продукт из микроводорослей и способ его получения [Электронный ресурс] / Мишенков Игорь Юрьевич (RU), Балейко Сергей Павлович (RU), Романов Евгений Александрович (RU); патентообладатель: Мишенков Игорь Юрьевич (RU); опубл. 10.04.2010. – URL: http://www.findpatent.ru/patent/232/2321272.html.

38. Ланская Л.А. Культивирование водорослей // Экологическая физиология морских планктонных водорослей (в условиях культур). – Киев: Наукова думка, 1971. – С. 5-21.

39. Chen B.J. Process development and evaluation for algal glycerol production / B. J. Chen, C. H. Chi // Biotechnol Bioengin. – 1981. – 23. – Pp. 1267-1287. DOI: 10.1002/bit.260230608.

40. St-Onge, M.-P. Consumption of a Functional Oil Rich in Phytosterols and Medium-Chain Triglyceride Oil Improves Plasma Lipid profiles in Men / Marie-Pierre St-Onge, Benoit Lamarche, Jean-Francois Mauger, Peter J. H. Jones // Journal of Nutrition. – No. 133. – Pр. 1815-1820. DOI:10.1093/jn/133.6.1815.

41. De Stefani E. Plant Sterols and Risk of Stomach Cancer: A Case-Control Study in Uruguay / Eduardo De Stefani, Paolo Boffetta, Alvaro L. Ronco, Paul Brennan, Hugo Deneo-Pellegrini, Julio C. Carzoglio & Maria Mendilaharsu // Nutrition and Cancer. – 2000. – Vol. 379(2). – Pp. 140-144. PMID: 11142085.

42. Оксоалкенилзамещённые циклогексены. Иононы, метилиононы и ироны с запахами фиалки, малины и ириса / А.Т. Солдатенков, Н.М. Колядина, Ле Туан Ань и [др.] // Основы органической химии душистых веществ для прикладной эстетики и ароматерапии / под ред. А. Т. Солдатенкова. – М.: ИКЦ Академкнига, 2006. – 240 с.

43. Meireles, Luís A. Lipid Class Composition of the Microalga Pavlova lutheri: Eicosapentaenoic and Docosahexaenoic Acids / Luís A. Meireles, Catarina A. Guedes, F. Xavier Malcata // Journal of Agricultural and Food Chemistry. – 2003. – 51 (8). – Pp. 2237-41. DOI: 10.1021/jf025952y.

44. Borowitzka M.A. Biology of Microalgae. Chapter 3 / M. A. Borowitzka // Microalgae in Health and Disease Prevention. – ACADEMIC PRESS, 2018. – Pp. 23-72. DOI: 10.1016/B978-0-12-811405-6.00003-7.

45. Geovanna P.-R. Antioxidant and Cytotoxic Effects on Tumor Cells of Exopolysaccharides from Tetraselmis suecica (Kylin) Butcher Grown Under Autotrophic and Heterotrophic Conditions / Parra-Riofrío Geovanna; García-Márquez, Jorge; Casas-Arrojo, Virginia; Uribe-Tapia, Eduardo; Abdala-Díaz, Roberto Teófilo // Mar Drugs. – 2020. – Vol. 18 (11): 534. DOI: 10.3390 / md18110534.

46. Mendiola J.A. Screening of functional compounds in supercritical fluid extracts from Spirulina platensis / J. A. Mendiola, L. Jaime, S. Santoyo, G. Reglero, A. Cifuentes, E. Ibañez, F. J. Señoráns // Food Chem. – 2007. – Vol. 102. – Pp. 1357-1367. DOI: 10.1016/j.foodchem.2006.06.068.

47. Sun L. Preparation of different molecular weight polysaccharides from Porphyridium cruentum and their antioxidant activities / L. Sun, C. Wang, Q. Shi, C. Ma // Int. J. Biol. Macromol. – 2009. – Vol. 45. – Pp. 42-47. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2009.03.013.

48. De Jesus Raposo M.F. Bioactivity and Applications of Polysaccharides from Marine Microalgae / Maria F. de Jesus Raposo, Rui M.S.C. Morais, Alcina M.de Morais // Mar Drug. – 2013. – Vol. 4511(1). – Pp. 233-252. DOI i: 10.3390/md11010233.

49. Taurine in health and diseases: consistent evidence from experimental and epidemiological studies / Yukio Yamori, Takashi Taguchi, Atsumi Hamada, Kazuhiro Kunimasa, Hideki Mori, Mari Mori // J Biomed Sci. – 2010. – 17. Suppl 1: S6. DOI: 10.1186/1423-0127-17-S1-S6.

50. Huxtable R. J. Physiological actions of taurine / R. J. Huxtable // Physiol Rev. – 1992. – Vol. 72(1). – Pp. 101-63. DOI: 10.1152/physrev.1992.72.1.101.

51. Seidel, U. Taurine: A Regulator of Cellular Redox Homeostasis and Skeletal Muscle Function / Ulrike Seidel, Patricia Huebbe, Gerald Rimbach // Mol Nutr Food Res. – 2019. – Vol. 63(16): e1800569. DOI: 10.1002/mnfr.201800569.

52. Ito T. The effect of taurine on chronic heart failure: actions of taurine against catecholamine and angiotensin II / Takashi Ito, Stephen Schaffer, Junichi Azuma // Amino Acids. – 2014. – Vol. 46(1). – Pp. 111-9. DOI: 10.1007/s00726-013-1507-z.

53. Фролов А.В. Влияние состава жирных кислот корма на выживаемость, скорость роста и состав липидов Artemia salina // В сб. Корма и методы кормления объектов марикультуры. – М.: ВНИРО, 1988. – С. 20–37.

54. Scott A.P. Unicellular algae as a food for turbot (Scophthalmus maximus L.) larvae the importance if dietary long-chain polyunsaturated fatty acids / A. P. Scott, C. Middelton // Aquaculture. – 1979. – Vol. 18. – Pр. 227-240. – URL: https://doi.org/10.1016/0044-8486(79)90014-0.

55. Cakmak Y.S. Biochemical composition and bioactivity screening of various extracts from Dunaliella salina, a green microalga / Y. S. Cakmak, M. Kaya, M. A. Ozusaglam // EXCLI Journal – 2014. – Vol. 13. – Pp. 679-690. – URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4464408.

56. Гладышев М.И. Незаменимые полиненасыщенные жирные кислоты и их пищевые источники для человека / М.И. Гладышев // Journal of Siberian Federal University. Biology. – 2012. – Т. 5. – С. 352–386. – URL: https://elib.sfu-kras.ru/bitstream/handle/ 2311/9554/Gladyshev.pdf?sequence=1.