Казань, Республика Татарстан, Россия
УДК 618.19-002 Мастит или маммит, воспаление молочной железы
УДК 636.2 Крупные жвачные животные. Крупный рогатый скот
Цель исследования – доклиническое изучение поливалентной вакцины против мастита коров. Вакцина изготовлена на основе инактивированных бактерий штаммов Streptococcus uberis «3Т-СД», Staphylococcus aureus «18-Ц», E. coli «19-СД». В качестве адъюванта использован 6 % гель гидроокиси алюминия. При доклиническом исследовании проведено изучение физико-химических характеристик вакцины, полноты инактивации и стерильности, безвредности, пирогенности, антигенной активности, а также определение оптимальной прививной дозы вакцины для коров и изучение безвредности двукратного введения вакцины в профилактической и повышенной дозах. Поливалентная вакцина против маститов стерильна, безвредна для лабораторных (кролики) и целевых (коровы) животных. Двукратное ее введение способствует у кроликов синтезу специфических антител в сыворотке крови к антигену Staphylococcus aureus в титре 853,33 ± 261,28, к антигенам Streptococcus uberis и E. coli в титрах 640,0 ± 0,0. Установление оптимальной прививной дозы препарата для целевых животных проведено на 3 группах коров по 5 гол. в каждой. Испытывались дозы 3; 5 и 7 см3. Оптимальная прививная доза вакцины для коров – 5 см3 при двукратном ее применении с интервалом 14 сут. После двукратного введения вакцины в профилактической и повышенной дозах у животных сохраняется нормальное физиологическое состояние, отсутствуют признаки патологических местных и системных реакций. Животные активно передвигаются, охотно принимают корм и воду, общая температура тела у них остается в пределах физиологической нормы.
коровы, мастит коров, поливалентная вакцина, доклиническое исследование вакцины, лабораторные животные
Введение. В скотоводческих хозяйствах маститы являются одной из распространенных болезней, где ежегодно переболевают различными формами маститов от 30 до 60 % коров. Причинами возникновения субклинических и клинических форм маститов, кроме не надлежащего содержания и кормления коров, является биологический фактор – патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, такие как Streptococcus spp., Staphylococcus spp., E. coli, Mycoplasma bovis, грибы Aspergillus spp., Candida spp. – возбудители акушерско-гинекологических заболеваний [1–4].
Маститы, особенно субклинические формы, причиняют производителям молока большой экономический ущерб, что связано с ухудшением качества молока и заболеваниями новорожденных телят вследствие приема некачественного молока/молозива, а также расходов на лечебно-оздоровительные мероприятия [5].
Широкое применение лекарственных средств для лечения и профилактики маститов не всегда достигает своей цели. Это связано с тем, что многие возбудители болезни по ходу их применения приобретают устойчивость к ним. Отрицательно сказывается также остаточное содержание антибиотиков на качество молока [6]. Поэтому необходимо изыскать новые подходы для борьбы с маститами коров. Нами для специфической профилактики мастита коров разработана вакцина поливалентная на основе инактивированных антигенов бактерий Streptococcus uberis, Staphylococcus aureus, E. coli – возбудителей мастита коров.
Цель исследования – доклиническое изучение поливалентной вакцины против мастита коров.
Объекты и методы. При доклиническом исследовании проводили изучение физико-химических характеристик вакцины, полноты инактивации и стерильности, безвредности, пирогенности, антигенной активности, а также определение оптимальной прививной дозы вакцины для коров.
Определение физико-химических характеристик вакцины проводили визуально. Контроль стерильности вакцины проводили микробиологическим путем по ГОСТ 28085-2013 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Методы контроля стерильности», определение безвредности – по ГОСТ 31926-2013 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Методы определения безвредности».
Определение пирогенности вакцины проводили на трех кроликах живой массой от 2,5 до 3,5 кг. В период проведения опытов кролики находились в отдельной комнате с постоянной температурой, с колебанием не более чем на ± 2 °С. Измерение температуры тела у кроликов осуществляли после введения вакцины пять раз с промежутками в один час. Вакцину считали не пирогенной, если сумма повышений температуры у кроликов была меньше или равна 1,4 °С.
Исследованием титров специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных оценивали антигенную активность вакцины. Для этого трем кроликам массой от 2,0 до
Определение оптимальной прививной дозы поливалентной вакцины проводили на 15 коровах в возрасте от 3 до 5 лет, живой массой от 550 до 650 кг, разделенных на три группы по пять голов в каждой. Коровам первой группы вакцину вводили двукратно, подкожно в дозе 3 см3, второй группы – 5 см3, третьей группы – 7 см3. От животных до введения вакцины, через 14 сут после первой и второй иммунизации отбирали пробы крови для определения титров специфических антител. По уровню антител определяли оптимальную прививную дозу вакцины.
Результаты и их обсуждение. Поливалентная вакцина против мастита коров изготовлена на основе инактивированных антигенов штаммов бактерий – возбудителей мастита коров Streptococcus uberis «3Т-СД», Staphylococcus aureus «18-Ц», E. coli «19-СД». Физико-химические и иммунобиологические показатели вакцины представлены в таблице 1.
Показатели антигенной активности вакцины представлены в таблице 2.
Таблица 1
Физико-химические и иммунобиологические показатели
поливалентной вакцины против мастита коров
Physico-chemical and immunobiological parameters
of the multivalent vaccine against cow mastitis
|
Показатель |
Поливалентная вакцина против мастита коров |
|
Физико-химические свойства |
Суспензия серовато-желтоватого цвета |
|
Стерильность |
Стерильна |
|
Безвредность |
Безвредна |
|
Пирогенность |
Апирогенна |
|
Антигенная активность в РА |
Индуцирует образование специфических антител: к Streptococcus uberis «3Т-СД» – 853,33±261,28; Staphylococcus aureus «18-Ц» – 640,0±0,0; E. coli «19-СД» – 640,0±0,0 |
Таблица 2
Титры специфических антител в сыворотке крови кроликов,
иммунизированных вакциной против мастита коров (M ± m) (n = 3)
Titers of specific antibodies in the blood serum of rabbits immunized
with the cow mastitis vaccine (M ± m) (n = 3)
|
Номер серии вакцины |
Вид антигена в поливалентной вакцине |
Уровень антител в РА |
||
|
Сроки исследования |
||||
|
до иммунизации |
после 1-й иммунизации |
после 2-й иммунизации |
||
|
1 |
Staphylococcus aureus |
0,0 ± 0,0 |
213,33 ± 65,32 |
853,33 ± 61,28 |
|
Streptococcus uberis |
0,0 ± 0,0 |
160,0 ± 0,0 |
640,0 ± 0,0 |
|
|
E. coli |
0,0 ± 0,0 |
213,33 ± 65,32 |
640,0 ± 0,0 |
|
|
2 |
Staphylococcus aureus |
0,0 ± 0,0 |
213,33 ± 65,32 |
853,33 ± 61,28 |
|
Streptococcus uberis |
0,0 ± 0,0 |
213,33 ± 65,32 |
640,0 ± 0,0 |
|
|
E. coli |
0,0 ± 0,0 |
160,0 ± 0,0 |
640,0 ± 0,0 |
|
Из таблицы 2 видно, что поливалентная вакцина против мастита коров обладает выраженной антигенной активностью. При двукратном введении она способствует накоплению специфических антител в крови кроликов к антигену Staphylococcus aureus в титре 853,33 ± 261,28, к антигенам Streptococcus uberis и E. coli в титрах 640,0 ± 0,0.
Результаты исследования по определению оптимальной дозы поливалентной вакцины для коров приведены в таблице 3.
Таблица 3
Титры специфических антител в сыворотке крови коров,
вакцинированных разными дозами вакцины (M ± m) (n = 5)
Titers of specific antibodies in the blood serum of cows vaccinated
with different doses of the vaccine (M ± m) (n = 5)
|
Доза вакцины, см3 |
Вид антигена в вакцине |
Уровень антител в РА |
||
|
Сроки исследования |
||||
|
до иммунизации |
после 1-й иммунизации |
после 2-й иммунизации |
||
|
3 + 3 |
Staphylococcus aureus |
0,0±0,0 |
256,00±43,82 |
512,00±87,64 |
|
Streptococcus uberis |
0,0±0,0 |
160,00±0,00 |
320,00±0,00 |
|
|
E. coli |
0,0±0,0 |
192,00±35,78 |
384,00±71,55 |
|
|
5 + 5 |
Staphylococcus aureus |
0,0±0,0 |
512,00±87,64 |
1024,00±175,27 |
|
Streptococcus uberis |
0,0±0,0 |
512,00±87,64 |
1024,00±175,27 |
|
|
E. coli |
0,0±0,0 |
576,00±71,55 |
1152,00±143,11 |
|
|
7 + 7 |
Staphylococcus aureus |
0,0±0,0 |
576,00±71,55 |
1152,00±143,11 |
|
Streptococcus uberis |
0,0±0,0 |
576,00±71,55 |
1152,00±143,11 |
|
|
E. coli |
0,0±0,0 |
576,00±71,55 |
1152,00±143,11 |
|
Данные, приведенные в таблице 3, свидетельствуют, что иммунизация коров поливалентной вакциной сопровождается образованием специфических антител в крови животных в высоких титрах против всех антигенных компонентов вакцины. Наиболее высокие титры выявлены у животных второй и третьей групп, двукратно вакцинированных в дозах 5 и 10 см3, соответственно. У животных третьей группы они были чуть выше, но достоверной разницы между титрами антител животных второй группы не выявлено. Таким образом, оптимальной прививной дозой вакцины для коров является 5 см3 при двукратном ее применении.
При исследовании установлено также, что после двукратного введения вакцины в профилактической и повышенной дозах у животных сохраняется нормальное физиологическое состояние. У них отсутствуют признаки патологических местных и системных реакций. Животные активно передвигаются, охотно принимают корм и воду, общая температура тела у них остается в пределах физиологической нормы (табл. 4, 5).
Таблица 4
Показатели температуры тела коров после 1-й вакцинации (M± m) (n = 5)
Body temperature of cows after 1 vaccination (M± m) (n = 5)
|
Группа животных (доза вакцины) |
Инвентарный номер животного |
Температура тела животных, °С |
|||
|
Перед введением вакцины |
После введения вакцины |
||||
|
через 24 ч |
через 48 ч |
через 96 ч |
|||
|
Первая – опытная (5 см3) |
280 |
38,6 |
38,4 |
38,5 |
38,5 |
|
900 |
38,1 |
38,4 |
38,2 |
38,1 |
|
|
922 |
38,4 |
38,5 |
38,5 |
38,6 |
|
|
664 |
38,5 |
38,5 |
38,4 |
38,5 |
|
|
1324 |
38,7 |
38,6 |
38,5 |
38,6 |
|
|
Средняя |
38,46±0,12 |
38,48±0,04 |
38,42±0,07 |
38,46±0,10 |
|
|
Вторая – опытная (10 см3) |
846 |
38,5 |
38,3 |
38,4 |
38,5 |
|
948 |
38,5 |
38,5 |
38,5 |
38,5 |
|
|
1414 |
38,8 |
38,5 |
38,6 |
38,5 |
|
|
1182 |
38,9 |
38,8 |
38,7 |
38,5 |
|
|
16/22 |
38,8 |
38,5 |
38,5 |
38,6 |
|
|
Средняя |
38,70±0,09 |
38,52±0,09 |
38,54± 0,06 |
38,52±0,02 |
|
|
Третья – контрольная |
732 |
38,7 |
38,6 |
38,5 |
38,6 |
|
1756 |
38,4 |
38,4 |
38,4 |
38,4 |
|
|
1494 |
38,5 |
38,5 |
38,6 |
38,5 |
|
|
12/25 |
38,7 |
38,7 |
38,6 |
38,5 |
|
|
1590 |
38,6 |
38,7 |
38,6 |
38,6 |
|
|
Средняя |
38,58±0,07 |
38,58±0,07 |
38,54±0,04 |
38,52±0,04 |
|
Таблица 5
Показатели температуры тела коров после 2-й вакцинации (M± m) (n = 5)
Body temperature of cows after the 2nd vaccination (M± m) (n = 5)
|
Группа животных (доза вакцины) |
Инвентарный номер животного |
Температура тела животных, °С |
|||
|
Перед ведением вакцины |
После введения вакцины |
||||
|
через 24 ч |
через 48 ч |
через 96 ч |
|||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Первая – опытная (5см3) |
280 |
38,5 |
38,5 |
38,4 |
38,5 |
|
900 |
38,3 |
38,5 |
38,4 |
38,2 |
|
|
922 |
38,5 |
38,4 |
38,5 |
38,5 |
|
|
664 |
38,5 |
38,5 |
38,5 |
38,5 |
|
|
1324 |
38,6 |
38,5 |
38,6 |
38,5 |
|
|
Средняя |
38,48±0,05 |
38,48±0,02 |
38,48±0,04 |
38,44±0,07 |
|
|
Вторая – опытная (10 см3) |
846 |
38,4 |
38,4 |
38,5 |
38,4 |
|
948 |
38,5 |
38,5 |
38,5 |
38,6 |
|
|
1414 |
38,6 |
38,5 |
38,6 |
38,5 |
|
|
1182 |
38,8 |
38,8 |
38,8 |
38,5 |
|
|
16/22 |
38,7 |
38,5 |
38,6 |
38,6 |
|
|
Средняя |
38,60±0,08 |
38,54±0,08 |
38,60±0,06 |
38,52±0,04 |
|
Окончание табл. 5
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Третья – контрольная |
732 |
38,6 |
38,4 |
38,3 |
38,5 |
|
1756 |
38,5 |
38,3 |
38,5 |
38,4 |
|
|
1494 |
38,4 |
38,5 |
38,4 |
38,5 |
|
|
12/25 |
38,5 |
38,5 |
38,4 |
38,5 |
|
|
1590 |
38,3 |
38,4 |
38,3 |
38,3 |
|
|
Средняя |
38,46±0,06 |
38,42±0,04 |
38,38±0,04 |
38,44±0,04 |
На месте введения вакцины в первые часы отмечается небольшая припухлость, самопроизвольно исчезающая в течение суток. Отличия в физиологическом состоянии у животных опытных и контрольной групп не отмечены.
Заключение
- Для специфической профилактики мастита коров изготовлена поливалентная вакцина на основе антигенов бактерий Streptococcus uberis, Staphylococcus aureus и E. coli.
- Доклиническое исследование вакцины показало, что она стерильна, безвредна для животных, не пирогенна, обладает выраженной антигенной активностью.
- Оптимальной прививной дозой для коров является 5 см3 при двукратном ее применении с интервалом 14 сут.
1. Бурова Л.А., Тотолян А.А. Основные факторы патогенности Streptococcus pyogenes // Инфекция и иммунитет. 2022. Т. 12, № 1. С. 33–50. https://doi.org/10.15789/2220-7619-MPF-1723.
2. Хамидуллин Р.Р., Тремасова А.М., Идиятов И.И., и др. Микробиоценоз половых путей у коров при остром послеродовом эндометрите // Ветеринарный врач. 2023. № 1. С. 64–69. https://doi.org/10.33632/1998-698X_2023_ 1_64. EDN: https://elibrary.ru/KYPNXO.
3. Осколкова М.В., Кузьмина Э.В. Этиология мастита и его взаимосвязь с гинекологическими заболеваниями крупного рогатого скота // Ветеринария. 2014. № 4 (48). С. 86–88.
4. Махмутов А.Ф., Спиридонов Г.Н., Дуплева Л.Ш., и др. Этиологическая структура маститов коров в крупных животноводческих комплексах по производству молока // Ветеринарный врач. 2023. № 2 . С. 4–9. https://doi.org/https://doi.org/10.33632/1998-698X_2023_2_4. EDN: https://elibrary.ru/EIKFNK.
5. Новикова Е.Н., Коба И.С., Шевченко А.Н. и др.,Метод профилактики акушерско-гинекологической патологии у коров // Ветеринария и кормление. 2018. № 6. С. 25–26. https://doi.org/10.30917/ ATT-VK-1814-9588-2018-6-9. EDN: https://elibrary.ru/YPTMSD.
6. Белбуцкая А.А., Скворцов В.Н., Белимова С.С. Антибиотикограмма микроорганизмов, выделенных от больных острым эндометритом коров // Ветеринарный врач. 2019. № 5. С. 4–10. https://doi.org/10.33632/1998-698X.2019-5-4-10. EDN: https://elibrary.ru/BNPHLB.
