Чита, Забайкальский край, Россия
, Россия
ВАК 14.03.2000 Медико-биологические науки
УДК 61 Медицина. Охрана здоровья
ГРНТИ 76.29 Клиническая медицина
ОКСО 31.08.51 Фтизиатрия
ББК 56 Клиническая медицина
ТБК 571 Медикобиологические дисциплины
ТБК 5770 Инфекционные и паразитарные болезни
BISAC MED079000 Pulmonary & Thoracic Medicine
Обследовано 120 пациентов с туберкулезом органов дыхания, находящихся на стационарном лечении, с целью выявить генотипы и частоту встречаемости аллелей генов Toll - рецепторов Asp299Gly – для TLR 4 и Ser249Pro – для TLR 6 у больных туберкулезом органов дыхания в зависимости от характера лекарственной чувствительности возбудителя. Диагноз "туберкулёз" установлен на основании характерной клинико-рентгенологической картины, подтвержден у 109 больных бактериологически, у 11 – гистологическим исследованием операционного материала. Исследовали мокроту на кислотоустойчивые бактерии методом микроскопии мазка с окраской по Цилю-Нельсену и люминисцентной микроскопией. Забор материала проводился в первые сутки госпитализации, до начала основного курса химиотерапии. При положительных результатах посева мокроты на питательные среды производилось определение лекарственной устойчивости возбудителя методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена. В результате исследования установлено, что генетический полиморфизм генов Toll–like–рецепторов у больных туберкулезом органов дыхания не является определяющим в развитии резистентности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам. Развитие туберкулеза с лекарственной устойчивостью является следствием заражения человека резистентными штаммами микобактерий туберкулеза. При этом полиморфизм генов Toll–like–рецепторов приводит к повышенной восприимчивости организма к патогенному действию микобактерий.
туберкулез легких, клеточный иммунитет, полиморфизм генов, сигнальные рецепторы, лекарственная резистентность бактерий
УДК: 616.24-002.5:579.25
Е.С. Богодухова, Е.Е. Байке канд. мед. наук
ФГБОУ ВО Читинская государственная медицинская академия, Чита
ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ TOLL – LIKE РЕЦЕПТОРОВ С УЧЕТОМ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА
Введение. Туберкулез хроническая инфекция, протекающая как незаметно, так и с картиной острого сепсиса. По данным литературы развитие туберкулеза вызывают разные причины, но главной является снижение эффективности функционирования иммунной системы. Взаимодействие врожденного и приобретенного иммунитета обеспечивает эффективный воспалительный ответ. Главную роль в эффективной работе иммунной системы играют Toll – подобные рецепторы. Toll – подобные рецепторы (англ. Toll - like receptor, TLR; от нем. toll — замечательный) — класс клеточных рецепторов с одним трансмембранным фрагментом, которые распознают консервативные структуры микроорганизмов и активируют клеточный иммунный ответ. На сегодняшний день известно 13 TLRs, среди которых TLR 1 - 9 выявляются у мышей и человека; TLR 10 – только у человека; TLR 11 - 13 – только у мышей.
До настоящего момента в литературе нет данных комплексного исследования Toll – like – рецепторов при туберкулезе, которые позволят установить роль сигнальных рецепторов в поддержании нормального реагирования иммунного ответа при туберкулезе легких, таким образомисследованиегенетического полиморфизма делает изучение данных рецепторов актуальным.
Цель исследования - выявить генотипы и частоту встречаемости аллелей генов Toll - рецепторов Asp299Gly – для TLR 4 и Ser249Pro – для TLR 6 у больных туберкулезом органов дыхания в зависимости от характера лекарственной чувствительности возбудителя.
Материалы и методы. Исследование проведено на базе терапевтического отделения ГБУЗ «Забайкальского краевого клинического фтизиопульмонологического центра». Нами обследовано 120 пациентов в возрасте 42,5 лет с туберкулезом органов дыхания, находящихся на лечении в отделении терапии, которые составили основную группу исследования. Диагноз туберкулёза установлен на основании характерной клинико-рентгенологической картины, кроме того, подтвержден у 109 больных бактериологически, у 11 – гистологическим исследованием операционного материала. Обязательным было исследование мокроты на кислотоустойчивые бактерии методом микроскопии мазка с окраской по Цилю - Нельсену и люминисцентной микроскопией. При получении положительных результатов посева мокроты на питательные среды производилось определение лекарственной устойчивости возбудителя методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна - Йенсена. Забор крови на исследование проводился в первые сутки от момента госпитализации, до начала основного курса химиотерапии. Группу сравнения составили 30 реципиентов в возрасте 38,5 лет никогда не болевших туберкулезом и не состоящих на учете в фтизиопульмонологическом центре. Все исследуемые жители Забайкальского края были сопоставимы по возрасту и полу.
Всеми реципиентами было подписано информированное согласие на участие в исследовании № 69/2014 от 24 декабря 2014 года, одобренное этическим комитетом при ФГБОУ ВО «Читинской государственной медицинской академии». Молекулярно – генетическое исследование материала проведено на базе НИИ Молекулярной медицины ЧГМА. Материалом для исследования послужили образцы ДНК, выделенные из лейкоцитов периферической венозной крови с помощью реагента «ДНК - экспресс – кровь» (ООО НТП «Литех», г. Москва). Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарном геле с добавлением бромистого этидия с ультрафиолетовой детекцией. Результаты анализа позволили дать три типа заключений: нормальная гомозигота, гетерозигота, мутантная гомозигота.
Распределение генотипов по исследуемым полиморфным локусам сравнивали на соответствие равновесию Харди - Вайнберга. Сравнение частот распределения генотипов в группах исследования проводили с помощью критерия χ2 (Пирсона) с поправкой Йейтса на непрерывность с использованием 4-польной таблицы сопряженности; если ожидаемых явлений в одной из ячеек было меньше 5, применяли точный критерий Фишера. Для оценки ассоциации изучаемых полиморфных вариантов генов с риском развития туберкулеза рассчитывали отношение шансов (Odds Ratio - OR) с доверительным интервалом 95%, причем OR=1 трактовали как «отсутствие ассоциаций»; OR>1 – как «положительную ассоциацию», OR<1 – как «отрицательную ассоциацию» генотипа с туберкулезом. Математическую обработку полученных результатов проводили методами непараметрической статистики на персональном компьютере при помощи Statistica 10 и с использованием online-калькулятора (http://gen-exp.ru/calculatoror.php).
Результаты. Группу больных туберкулезом поделили на несколько подгрупп в зависимости от теста лекарственной чувствительности. В первую подгруппу вошли лица без лекарственной устойчивости М. Tuberculosis (МБТ) (n=48); 2 – с лекарственной устойчивостью (n=34); 3 – с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) (n=38). В ходе молекулярно - генетического исследования у лиц клинической группы и группы контроля, при полиморфизме генов Toll - подобных рецепторов, были выявлены все искомые генетические мутации в гомо - и гетерозиготном состояниях.
В группе туберкулеза без лекарственной устойчивости МБТ и в группе контроля установлено, что частота встречаемости гомозиготного генотипа Asp/Asp полиморфного варианта в локусе -299 гена TLR 4 (Asp299Gly) была в 25,9 раза ниже по сравнению с его частотой в группе контроля (OR=0,084 [95% CI: 0,010 – 0,676]. При этом носители гетерозиготного Asp/Gly изучаемого гена в группе здоровых встречались в 21,7% реже, чем обладатели аналогичных генотипов среди больных реципиентов (OR=9,667 [95% CI: 1,186 – 78,769]. Мутантный полиморфизм Gly/Gly данного гена определялся только в группе с туберкулезом без лекарственной устойчивости и составил 4,2% соответственно. Частота встречаемости генотипов полиморфизма гена TLR 6 (Ser249Pro) у здоровых доноров и больных туберкулезом с сохраненной лекарственной устойчивостью МБТ была сопоставимой.
При изучении группы больных туберкулезом с лекарственной устойчивостью МБТ статистически значимые данные получены при распределении генотипов полиморфизма гена TLR 6 (Ser249Pro). Гомозиготный генотип по мутантному полиморфизму Pro/Pro гена TLR6 у больных туберкулезом обнаруживался в 20 раз чаще по сравнению с группой контроля (OR=0,500 [95% CI: 0,091 – 2,657].
В группе больных страдающих туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью, анализ частоты распределения генотипов полиморфизма гена TLR 6 (Ser249Pro) среди больных туберкулезом выявил снижение частоты носительства гетерозиготного генотипа Ser/Pro (в 13,7 раза) (OR=0,130 [95% CI: 0,026 – 0,658]. Увеличение числа обладателей гомозиготного генотипа по мутантному полиморфизму Pro/Pro (в 38,5 раза) по сравнению с таковыми у здоровых лиц (OR=5,056 [95% CI: 0,790 – 14,276].
Выводы. Таким образом, мы предполагаем, что генетический полиморфизм генов Toll – like – рецепторов у больных туберкулезом органов дыхания не является определяющим в развитии резистентности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам. Развитие туберкулеза с лекарственной устойчивостью является следствием заражения человека резистентными штаммами микобактерий туберкулеза. В свою очередь, полиморфизм генов Toll – like – рецепторов приводит к повышенной восприимчивости организма к патогенному действию микобактерий.
1. Байке Е.Е. Влияние препаратов селена на показатели антиоксидантной защиты в крови у больных туберкулезом легких. / Е.Е.Байке, Ю.Н.Степанова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2011. - № 2(78). – С.240-241.
