Blagoveschensk, Blagoveshchensk, Russian Federation
Blagoveschensk, Blagoveshchensk, Russian Federation
UDK 61 Медицина. Охрана здоровья
GRNTI 76.03 Медико-биологические дисциплины
GRNTI 76.29 Клиническая медицина
OKSO 31.06.2001 Клиническая медицина
BBK 54 Клиническая медицина
TBK 571 Медикобиологические дисциплины
TBK 5763 Беременность. Вскармливание и уход за новорожденными детьми
BISAC MED068000 Pathophysiology
The relationship between the concentration of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) in the placenta homogenate and its histometric parameters in women during physiological pregnancy and during pregnancy complicated by an exacerbation of cytomegalovirus infection in the second trimester of gestation, leading to the development of chronic compensated placental insufficiency, was studied.
tumor necrosis factor TNF-α, placenta, intervillous space, syncytiotrophoblast, chorionic blood vessels, cytomegalovirus
Обострение цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) у женщин во втором триместре беременности сопровождается антенатальным инфицированием плаценты, увеличением пула промежуточных незрелых ворсин, содержащих клетки Кащенко-Гофбауэра (плацентарные макрофаги) и очагов воспаления [2], а также содержания провоспалительных цитокинов [1]. Однако до настоящего времени не показана степень выраженности внутриорганного накопления в гомогенате органа TNF-α и его влияние на соотношение различных компонентов ворсинчатого хориона при обострении цитомегаловирусной инфекции.
Цель работы – установить взаимосвязь иммуно-гистометрических показателей плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции у женщин во втором триместре беременности.
Материалы и методы исследования
Определялось содержание TNF-α в гомогенате 90 плацент и их гистометрические показатели от женщин с различным течением беременности. Ретроспективно выделялись 3 группы. Первую группу составили 30 плацент от серонегативных женщин с физиологической беременностью, вторую - 30 плацент от пациенток с обострением цитомегаловирусной инфекции, инициирующим развитие хронической компенсированной плацентарной недостаточности (ПН), а третью - 30 плацент от женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции, приводящим к хронической субкомпенсированной ПН.
Обострение ЦМВИ диагностировалось по наличию в крови антител IgМ к ЦМВ, высокоавидных IgG (индекс авидности >65%) (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), а также ДНК ЦМВ в соскобах с буккального эпителия, содержимого цервикального канала и ткани плодной части плаценты (НПО «ДНК-технология», Москва).
При постановке диагноза хронической компенсированной и субкомпенсированной ПН использовались общепринятые функциональные и морфологические методы [3, 4].
Для иммуноферментного исследования концентрации TNF-α в гомогенате плаценты, базальная поверхность последней отмывалась значительным количеством физиологического раствора. Из центральной и периферической зон плодовой части органа вырезались скальпелем участки ткани площадью 2-3 см2 и толщиной около 1-2 мм. После помещения кусочков плаценты в 200 мл 0,9% раствора натрия хлорида, проводилось их отмывание от форменных элементов крови, посредством их перемешивания в течение 15 минут на магнитной мешалке. С целью получения экстрактов, отмытые кусочки органа слегка подсушивались на фильтровальной бумаге и взвешивались. Затем они растирались пестиком в фарфоровой ступке и подвергались гомогенизации до получения однородной массы. К гомогенату добавляли физиологический раствор в объёме, равном массе ткани (на 1г - 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида). Полученная взвесь помещалась в пластиковые пробирки Falcon и замораживались при температуре -200С в течение одних суток. Затем гомогенат размораживали и центрифугировали при 4000 g (температура - +40С). Полученная надосадочная часть жидкости разливалась мелкими аликвотами и хранилась при температуре -200С до постановки иммуноферментного анализа.
Гистометрически в плаценте исследовалось соотношение её различных структур: 1) межворсинчатого пространства; 2) стромы ворсин; 3) синцитиотрофобласта; 4) кровеносных сосудов. Для стереометрии использовалась квадратная многоцелевая стереометрическая решетка (100-точечная), которая помещалась в окуляр микроскопа (увеличение 15х20). Частота выявления вышеуказанных показателей (в %) рассчитывалась на общее количество точек (500 в каждой плаценте).
У всех обследованных проведение серологического, молекулярно-генетического, иммуноферментного и морфометрического анализа осуществлялось в соответствии с кодексом этических принципов Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации с поправками 2013 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Минздрава РФ №200н от 1 апреля 2016 года. Cтатистическая обработка данных проводилась с использованием пакета программ Statistica 10.0. При оценке достоверности различия значений сравниваемых параметров между разными выборками использовали непарный t-критерий Стьюдента. Различия считались статистически достоверными при достигнутом уровне значимости р<0,05. Зависимость между показателями регистрировалась с помощью корреляционного анализа по Спирмену (r).
Результаты исследования и их обсуждение
В первой группе в гомогенате плацент, полученных при родах в срок, концентрация TNF-α составляла 16,8±1,86 пг/мл, удельный объём межворсинчатого пространства – 27,0±1,59%, стромы - 33,9±1,42%, синцитиотрофобласта – 25,3±1,25% и кровеносных сосудов ворсин – 9,7±0,54% (табл. 1).
При оценке иммуно-гистометрических связей обнаруживалась умеренная позитивная корреляция провоспалительного цитокина в гомогенате органа и кровеносного русла ворсин (r= + 0,54; p<0,01). Во второй группе, включавшую плаценты от женщин с обострением ЦМВИ, инициирующим развитие хронической компенсированной ПН в отличие от первой регистрировалось увеличение TNF-α в гомогенате органа до 60,2±3,47 пг/мл (р<0,001). Гистометрически в плаценте не отмечалось изменения доли интервиллезного пространства (р>0,05), стромы (р>0,05) и кровеносного русла (р>0,05). Однако снижалось количество синцитиотрофобласта до 19,6±1,48%, (р<0,05). Между провоспалительным цитокином в гомогенате органа, интервиллезным пространством и синцитиотрофобластом выявлялась слабая корреляционная связь (r= - 0,46; p<0,01 и
r= - 0,47; p<0,01, соответственно). Это указывало на ингибирующее влияние биологического маркера локального воспаления на размеры межворсинчатого пространства и структурно-функциональное состояние синцития. В то же время регистрировалась слабая прямая связь уровня TNF-α в гомогенате органа и кровеносных сосудов, объясняющая стимулирующую роль цитокина в процессе роста и дифференцировки кровеносного русла ворсин (r= + 0,46; p<0,05).
Таблица 1 Изменение удельного объёма межворсинчатого пространства (МВП), стромы (СТ), синцитиотрофобласта (СТБ) и кровеносных сосудов ворсин хориона у женщин, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности, в исследуемых группах (М±m).
|
Показатели |
Исследуемые группы |
||
|
Первая |
Вторая |
Третья |
|
|
МВП, % |
27,0±1,59 |
26,9±1,57 p1>0,05 |
30,1±1,52 p1>0,05 p2>0,05 |
|
СТ, % |
33,9±1,42 |
31,4±1,84 p1>0,05 |
33,8±1,50 p1>0,05 p2>0,05 |
|
СТБ, % |
25,3±1,25 |
19,6±1,48 p1<0,05
|
15,0±1,36 p1>0,05 p2<0,05 |
|
Кровеносные сосуды, % |
9,7±0,54 |
10,9±0,85 p1>0,05 |
8,17±0,72 p1>0,05 p2<0,05 |
Примечание: р1 – уровень статистической значимости различия по сравнению с первой группой; р2 – уровень статистической значимости различия по сравнению со второй группой.
В плацентах третьей группы по сравнению со второй определялась более высокая концентрация TNF-α в гомогенате плаценты (79,2±7,48 пг/мл), падение удельного объёма синцитиотрофобласта до 15,0±1,36% (р<0,05) и кровеносных сосудов ворсин до 8,17±0,72% (р<0,05). В то же время не выявлялись значимые различия показателей межворсинчатого пространства (р>0,05) и стромы ворсин хориона (р>0,05). При этом документировались отрицательные связи между содержанием TNF-α в гомогенате органа, синцитием (r= - 0,62; p<0,001) и кровеносным руслом (r= - 0,41; p<0,05), указывающие на первостепенную роль цитокина в подавление процессов роста и дифференцировки вышеуказанных морфологических структур. Обнаруживалось стимулирующее влияние провоспалительного цитокина на развитие стромы в ворсинах хориона (r= +0,40; p<0,05) при формировании хронической субкомпенсированной ПН.
Таким образом, при обострении у женщин ЦМВИ во втором триместре гестации накопление в гомогенате провизорного органа TNF-α и изменение его корреляционных связей с ворсинчатым хорионом, играют важную роль в патогенезе хронической ПН.
1. Babenko O.P. Immuno-gormonal'nye zakonomernosti formirovaniya placentarnoy nedostatochnosti u seropozitivnyh beremennyh pri obostrenii citomegalovirusnoy infekcii: Avtoref. diss. kand med. nauk., Irkutsk, 2015. 25 s.
2. Gorikov I.N., Andrievskaya I.A., Ishutina N.A., Dovzhikova I.V. Arhitektonika ven plodnoy chasti placenty pri citomegalovirusnoy infekcii vo II trimestre beremennosti // Arhiv patologii. 2019. T.81, №4. S.43-47.
3. Milovanov A.P. Patologiya sistemy mat'-placenta-plod: Rukovodstvo dlya vrachey. M.: Medicina; 1999. 448 s.
4. Strizhakov A.N., Voloschuk I.N., Timohina E.V., Kozlova U.A. Morfofunkcional'nye izmeneniya v placente pri placentarnoy nedostatochnosti razlichnoy stepeni tyazhesti // Voprosy ginekologii, akusherstva i perinatologii. 2010. T.9 (2). S.5-11.
