Благовещенск, Амурская область, Россия
Благовещенск, Амурская область, Россия
УДК 61 Медицина. Охрана здоровья
ГРНТИ 76.03 Медико-биологические дисциплины
ГРНТИ 76.29 Клиническая медицина
ОКСО 31.06.2001 Клиническая медицина
ББК 54 Клиническая медицина
ТБК 571 Медикобиологические дисциплины
ТБК 5763 Беременность. Вскармливание и уход за новорожденными детьми
BISAC MED068000 Pathophysiology
Изучена взаимосвязь концентрации фактора некроза опухолей-альфа (TNF-α) в гомогенате плаценты и её гистометрических показателей у женщин при физиологической беременности и при беременности, осложненной обострением цитомегаловирусной инфекции во втором триместре гестации, приводящим к развитию хронической компенсированной плацентарной недостаточности.
фактор некроза опухолей TNF-α, плацента, межворсинчатое пространство, синцитиотрофобласт, кровеносные сосуды хориона, цитомегаловирус
Обострение цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) у женщин во втором триместре беременности сопровождается антенатальным инфицированием плаценты, увеличением пула промежуточных незрелых ворсин, содержащих клетки Кащенко-Гофбауэра (плацентарные макрофаги) и очагов воспаления [2], а также содержания провоспалительных цитокинов [1]. Однако до настоящего времени не показана степень выраженности внутриорганного накопления в гомогенате органа TNF-α и его влияние на соотношение различных компонентов ворсинчатого хориона при обострении цитомегаловирусной инфекции.
Цель работы – установить взаимосвязь иммуно-гистометрических показателей плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции у женщин во втором триместре беременности.
Материалы и методы исследования
Определялось содержание TNF-α в гомогенате 90 плацент и их гистометрические показатели от женщин с различным течением беременности. Ретроспективно выделялись 3 группы. Первую группу составили 30 плацент от серонегативных женщин с физиологической беременностью, вторую - 30 плацент от пациенток с обострением цитомегаловирусной инфекции, инициирующим развитие хронической компенсированной плацентарной недостаточности (ПН), а третью - 30 плацент от женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции, приводящим к хронической субкомпенсированной ПН.
Обострение ЦМВИ диагностировалось по наличию в крови антител IgМ к ЦМВ, высокоавидных IgG (индекс авидности >65%) (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), а также ДНК ЦМВ в соскобах с буккального эпителия, содержимого цервикального канала и ткани плодной части плаценты (НПО «ДНК-технология», Москва).
При постановке диагноза хронической компенсированной и субкомпенсированной ПН использовались общепринятые функциональные и морфологические методы [3, 4].
Для иммуноферментного исследования концентрации TNF-α в гомогенате плаценты, базальная поверхность последней отмывалась значительным количеством физиологического раствора. Из центральной и периферической зон плодовой части органа вырезались скальпелем участки ткани площадью 2-3 см2 и толщиной около 1-2 мм. После помещения кусочков плаценты в 200 мл 0,9% раствора натрия хлорида, проводилось их отмывание от форменных элементов крови, посредством их перемешивания в течение 15 минут на магнитной мешалке. С целью получения экстрактов, отмытые кусочки органа слегка подсушивались на фильтровальной бумаге и взвешивались. Затем они растирались пестиком в фарфоровой ступке и подвергались гомогенизации до получения однородной массы. К гомогенату добавляли физиологический раствор в объёме, равном массе ткани (на 1г - 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида). Полученная взвесь помещалась в пластиковые пробирки Falcon и замораживались при температуре -200С в течение одних суток. Затем гомогенат размораживали и центрифугировали при 4000 g (температура - +40С). Полученная надосадочная часть жидкости разливалась мелкими аликвотами и хранилась при температуре -200С до постановки иммуноферментного анализа.
Гистометрически в плаценте исследовалось соотношение её различных структур: 1) межворсинчатого пространства; 2) стромы ворсин; 3) синцитиотрофобласта; 4) кровеносных сосудов. Для стереометрии использовалась квадратная многоцелевая стереометрическая решетка (100-точечная), которая помещалась в окуляр микроскопа (увеличение 15х20). Частота выявления вышеуказанных показателей (в %) рассчитывалась на общее количество точек (500 в каждой плаценте).
У всех обследованных проведение серологического, молекулярно-генетического, иммуноферментного и морфометрического анализа осуществлялось в соответствии с кодексом этических принципов Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации с поправками 2013 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Минздрава РФ №200н от 1 апреля 2016 года. Cтатистическая обработка данных проводилась с использованием пакета программ Statistica 10.0. При оценке достоверности различия значений сравниваемых параметров между разными выборками использовали непарный t-критерий Стьюдента. Различия считались статистически достоверными при достигнутом уровне значимости р<0,05. Зависимость между показателями регистрировалась с помощью корреляционного анализа по Спирмену (r).
Результаты исследования и их обсуждение
В первой группе в гомогенате плацент, полученных при родах в срок, концентрация TNF-α составляла 16,8±1,86 пг/мл, удельный объём межворсинчатого пространства – 27,0±1,59%, стромы - 33,9±1,42%, синцитиотрофобласта – 25,3±1,25% и кровеносных сосудов ворсин – 9,7±0,54% (табл. 1).
При оценке иммуно-гистометрических связей обнаруживалась умеренная позитивная корреляция провоспалительного цитокина в гомогенате органа и кровеносного русла ворсин (r= + 0,54; p<0,01). Во второй группе, включавшую плаценты от женщин с обострением ЦМВИ, инициирующим развитие хронической компенсированной ПН в отличие от первой регистрировалось увеличение TNF-α в гомогенате органа до 60,2±3,47 пг/мл (р<0,001). Гистометрически в плаценте не отмечалось изменения доли интервиллезного пространства (р>0,05), стромы (р>0,05) и кровеносного русла (р>0,05). Однако снижалось количество синцитиотрофобласта до 19,6±1,48%, (р<0,05). Между провоспалительным цитокином в гомогенате органа, интервиллезным пространством и синцитиотрофобластом выявлялась слабая корреляционная связь (r= - 0,46; p<0,01 и
r= - 0,47; p<0,01, соответственно). Это указывало на ингибирующее влияние биологического маркера локального воспаления на размеры межворсинчатого пространства и структурно-функциональное состояние синцития. В то же время регистрировалась слабая прямая связь уровня TNF-α в гомогенате органа и кровеносных сосудов, объясняющая стимулирующую роль цитокина в процессе роста и дифференцировки кровеносного русла ворсин (r= + 0,46; p<0,05).
Таблица 1 Изменение удельного объёма межворсинчатого пространства (МВП), стромы (СТ), синцитиотрофобласта (СТБ) и кровеносных сосудов ворсин хориона у женщин, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности, в исследуемых группах (М±m).
|
Показатели |
Исследуемые группы |
||
|
Первая |
Вторая |
Третья |
|
|
МВП, % |
27,0±1,59 |
26,9±1,57 p1>0,05 |
30,1±1,52 p1>0,05 p2>0,05 |
|
СТ, % |
33,9±1,42 |
31,4±1,84 p1>0,05 |
33,8±1,50 p1>0,05 p2>0,05 |
|
СТБ, % |
25,3±1,25 |
19,6±1,48 p1<0,05
|
15,0±1,36 p1>0,05 p2<0,05 |
|
Кровеносные сосуды, % |
9,7±0,54 |
10,9±0,85 p1>0,05 |
8,17±0,72 p1>0,05 p2<0,05 |
Примечание: р1 – уровень статистической значимости различия по сравнению с первой группой; р2 – уровень статистической значимости различия по сравнению со второй группой.
В плацентах третьей группы по сравнению со второй определялась более высокая концентрация TNF-α в гомогенате плаценты (79,2±7,48 пг/мл), падение удельного объёма синцитиотрофобласта до 15,0±1,36% (р<0,05) и кровеносных сосудов ворсин до 8,17±0,72% (р<0,05). В то же время не выявлялись значимые различия показателей межворсинчатого пространства (р>0,05) и стромы ворсин хориона (р>0,05). При этом документировались отрицательные связи между содержанием TNF-α в гомогенате органа, синцитием (r= - 0,62; p<0,001) и кровеносным руслом (r= - 0,41; p<0,05), указывающие на первостепенную роль цитокина в подавление процессов роста и дифференцировки вышеуказанных морфологических структур. Обнаруживалось стимулирующее влияние провоспалительного цитокина на развитие стромы в ворсинах хориона (r= +0,40; p<0,05) при формировании хронической субкомпенсированной ПН.
Таким образом, при обострении у женщин ЦМВИ во втором триместре гестации накопление в гомогенате провизорного органа TNF-α и изменение его корреляционных связей с ворсинчатым хорионом, играют важную роль в патогенезе хронической ПН.
1. Бабенко О.П. Иммуно-гормональные закономерности формирования плацентарной недостаточности у серопозитивных беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции: Автореф. дисс. канд мед. наук., Иркутск, 2015. 25 с.
2. Гориков И.Н., Андриевская И.А., Ишутина Н.А., Довжикова И.В. Архитектоника вен плодной части плаценты при цитомегаловирусной инфекции во II триместре беременности // Архив патологии. 2019. Т.81, №4. С.43-47.
3. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод: Руководство для врачей. М.: Медицина; 1999. 448 с.
4. Стрижаков А.Н., Волощук И.Н., Тимохина Е.В., Козлова У.А. Морфофункциональные изменения в плаценте при плацентарной недостаточности различной степени тяжести // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2010. Т.9 (2). С.5-11.
